氣單胞菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的工藝條件優(yōu)化和應(yīng)用初探.pdf

1、幾丁質(zhì)酶(chitinase Ec.3.2.14)能夠催化幾丁質(zhì)水解為幾丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖，廣泛存在于各種微生物、植物及動物細(xì)胞和組織中。由于幾丁質(zhì)酶在生物防治和處理幾丁質(zhì)廢物等方面具有巨大的應(yīng)用潛力，因而受到廣泛的重視。 本文對實驗室保藏的幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌Ch2進行了形態(tài)結(jié)構(gòu)特征、生理生化特征的鑒定，并用Biolog進行分析，初步確定為氣單胞菌屬(Aeromonas sp.)菌株。通過對Ch2菌株的生長曲線、生長條件的

2、研究，初步了解菌株的生長特性。 進行了.Aeromonas sp.Ch2發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化，以提高其產(chǎn)酶活力。經(jīng)優(yōu)化確定的較佳培養(yǎng)基組成為：膠體幾丁質(zhì)0.5％，蛋白胨1.2％，尿素0.2％，MgSO4 0.05％，K2HPO4 0.03％，NaCl 0.5％；較佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基初始pH為6.5-7.0，培養(yǎng)溫度為28℃，接種量為6％，搖瓶裝量為50 mL培養(yǎng)基/250 mL 三角瓶，180 r/min搖床培養(yǎng)3d。按優(yōu)化工

3、藝進行發(fā)酵，菌體產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的活性達到1.69 U/mL，比優(yōu)化實驗前提高了7.5倍。 進行了該菌3 L發(fā)酵罐產(chǎn)酶的研究，比較了分批發(fā)酵和補料發(fā)酵過程中發(fā)酵液中菌體生長規(guī)律， pH、還原糖和酶活力之間的關(guān)聯(lián)情況。補料發(fā)酵時，幾丁質(zhì)酶的活力在65h達到產(chǎn)酶高峰，達到1.802U/ml，產(chǎn)酶高峰比分批發(fā)酵提前7h，酶活力比分批發(fā)酵提高了5％。粗酶液經(jīng)硫酸銨鹽析(60％飽和度，4℃)、親和層析(以再生脫乙酰幾丁質(zhì)為介質(zhì))純化后，樣品經(jīng)