產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株的篩選.pdf

1、幾丁質(zhì)酶是一種專一性降解幾丁質(zhì)的水解酶。在工業(yè)上，幾丁質(zhì)酶可用于制備功能性甲殼低聚糖；在農(nóng)業(yè)上可作為生物控制劑，提高植物的抗病能力；在生物技術(shù)方面，可以用幾丁質(zhì)酶并輔以其它手段制備真菌原生質(zhì)體，為細(xì)胞分子生物學(xué)提供工具酶。研究發(fā)現(xiàn)高等植物、鳥類、昆蟲等動(dòng)物及微生物都能夠分泌幾丁質(zhì)酶類，但只有微生物幾丁質(zhì)酶具有開發(fā)應(yīng)用的價(jià)值。本論文致力于從自然界中獲得一株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株，從采集土樣開始，進(jìn)行了以下幾個(gè)方面的研究： 1．用以幾丁質(zhì)為

2、唯一碳氮源的平板培養(yǎng)基，從55份土樣中共篩選到428株能產(chǎn)透明圈的菌株，再以透明圈與菌落直徑比值的大小作為參考，結(jié)合搖瓶復(fù)篩，最終選取菌株 L<,012>為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)菌株，其酶活力達(dá) 0.75U/mL；采用紙層析和離子色譜法對(duì)菌株L<,012>產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的酶解產(chǎn)物進(jìn)行分析，初步確定產(chǎn)物中有氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖、以及聚合度小于10的寡糖。 2．通過對(duì)L<,012>菌落形態(tài)、菌絲體形態(tài)的觀察，細(xì)胞壁氨基酸成分、全細(xì)胞糖成分的分

3、析以及對(duì)其部分生理生化性質(zhì)的考察，初步判斷其屬于類諾卡氏菌屬。 3．通過對(duì)培養(yǎng)基組分的單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了菌株L<,012>的最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基(g/L)：細(xì)粉幾丁質(zhì)10，淀粉3，玉米漿3，NaNO<,3> 1.0，K<,2>HPO<,4> 1.05，KH<,2>PO<,4> 0.45，NaCl 0.1，MgSO<,4>·7H<,2>O 0.3，F(xiàn)eSO<,4>·7H<,2>O 0.03，pn 7.0；通過對(duì)發(fā)酵起始pH，培

4、養(yǎng)溫度，溶氧量，產(chǎn)酶時(shí)程，接種種齡以及接種量等培養(yǎng)條件的考察，確定了菌株L<,012>的最佳發(fā)酵產(chǎn)酶條件：起始pH：7.0，培養(yǎng)溫度：30℃，發(fā)酵時(shí)程：48h，種齡：24h，搖瓶裝液量：30mL，轉(zhuǎn)速：180r/min，接種量：10﹪；條件優(yōu)化后L<,012>菌株的產(chǎn)酶活力從原來的0.75U/mL，提高到2.31U/mL。 4．論文對(duì)菌株L<,012>粗酶性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，結(jié)果表明：菌株Lol2所產(chǎn)幾丁質(zhì)酶在4℃儲(chǔ)存時(shí)穩(wěn)定性

5、好，三個(gè)月后依然保存有94﹪的酶活性；最適作用溫度在45℃左右，在50℃以下熱穩(wěn)定性較好，超過65℃易失活；最適作用pH6.5，pH6.0～7.5范圍內(nèi)穩(wěn)定性好，酸性環(huán)境下非常易失活，堿性條件下相對(duì)穩(wěn)定；該酶可以耐受1.5mmol/L，的離子強(qiáng)度；Ag<'+>，F(xiàn)e<'2+>，Ca<'2+>，Mn<'2+>對(duì)該酶有比較明顯的激活作用，Hg<'+>對(duì)酶活力有明顯的抑制作用，Ca<'2+>和Mg<'2+>有輕微的抑制作用，NH<,4><'+