FoxM1在髓系白血病中作用及其機制.pdf

1、背景：髓系白血病包括急性髓系白血?。ˋML）和慢性髓細胞白血?。–ML，簡稱慢粒）。AML是最常見急性白血病，疾病發(fā)展迅速，自然病程數(shù)月。以蒽環(huán)類和阿糖胞苷為主的聯(lián)合化療是非急性早幼粒細胞白血病的AML的主要治療方法，但治療療效并不理想。由于AML疾病性質高度異質，一些基于AML發(fā)生發(fā)展相關分子為靶點的藥物不能滿足臨床治療的需要。因此，深入研究AML發(fā)生發(fā)展的機制，發(fā)現(xiàn)新的潛在治療靶標是重要科學問題。慢性髓細胞白血病包含慢性期、加速期和

2、急變期。酪氨酸激酶抑制劑對慢性期療效好，對加速期和急變期療效差。高三尖杉酯堿（HHT）是我國從三尖杉屬植物中分離出的抗腫瘤生物堿，研究發(fā)現(xiàn)HHT通過不依賴于BCR/ABL的機制發(fā)揮作用，對于CML加速期和急變期，以及對酪氨酸激酶抑制劑耐藥的CML患者均有效。但HHT有較強的心臟、骨髓抑制、高血糖等毒副作用，臨床用藥受限，因此發(fā)現(xiàn)與HHT具有協(xié)同作用的增敏分子，降低HHT的臨床有效用藥劑量，是提高HHT藥物效應的重要策略。叉頭框蛋白M1（

3、FoxM1）是在有絲分裂G1/S和G2/M期中起正向調控的轉錄因子，在一些實體瘤中FoxM1過度表達，通過誘發(fā)細胞異常增殖參與惡性轉化，而在大多數(shù)正常成熟組織細胞FoxM1不表達，因此被認為是抗腫瘤的潛在靶標，但 FoxM1在急性白血病中作用的研究報道少見。原癌基因B淋巴細胞瘤-2（BCL2）是最受關注的細胞凋亡抑制基因，F(xiàn)oxM1能否調控BCL2在AML中發(fā)揮作用值得關注。HHT屬于細胞周期特異性藥物，F(xiàn)oxM1主要通過調控細胞周期相

4、關分子轉錄介導細胞增殖參與腫瘤發(fā)生，抑制FoxM1可提高實體瘤細胞對化療藥物敏感性。FoxM1和HHT都可以調控細胞周期，靶向干預FoxM1表達是否可以協(xié)同增敏 HHT抗白血病效應未見報道。
　　目的：⑴探討FoxM1及其調控的BCL2在AML發(fā)生發(fā)展中作用。⑵探討抑制慢粒急變細胞K562的FoxM1對于增強HHT的藥物敏感性。
　　方法：①qRT-PCR和細胞免疫熒光方法檢測AML初診組（de novo）、治療達完全緩解組

5、（CR）和難治復發(fā)組（RR）各17例患者FoxM1 mRNA水平和蛋白表達；轉染FoxM1siRNA抑制白血病HL60和K562細胞FoxM1表達，觀察對細胞生長、克隆形成和細胞凋亡的影響；qRT-PCR和Western Blot法檢測FoxM1對BCL2表達的影響，雙熒光素酶活性實驗檢測FoxM1是否可以靶向作用于BCL2啟動子區(qū)域進而影響B(tài)CL2表達。②HHT以不同濃度（0μmol/L，0.015μmol/L，0.03μmol/L，

6、0.045μmol/L）和最低起效濃度不同時間點（0.015μmol/L，0h，24h，48h，72h）作用K562細胞，qRT-PCR和Western blot法檢測FoxM1 mRNA和蛋白表達；以0.015μmol/L HHT作用K562細胞后轉染FoxM1 siRNA，觀察沉默K562細胞FoxM1后HHT的藥物敏感性、細胞增殖和凋亡效應以及FoxM1相關靶分子c-myc和Sp1表達狀況。
　　結果：⑴AMLdenovo組

7、患者骨髓標本FoxM1表達較正常對照顯著升高，CR組FoxM1表達較初診組降低，RR組FoxM1表達較初診組進一步升高。轉染FoxM1 siRNA沉默HL60和K562細胞FoxM1表達后，細胞生長速率下降，細胞克隆形成能力降低，細胞凋亡率升高，BCL2表達降低，雙熒光素酶活性實驗證實FoxM1可靶向作用BCL2啟動子區(qū)域調控BCL2表達。⑵隨著HHT濃度增加和作用時間延長FoxM1表達逐漸降低，說明HHT抑制K562細胞FoxM1表達

8、；HHT處理K562細胞后轉染FoxM1 siRNA，細胞生長和克隆形成顯著下降，細胞凋亡增加，因此抑制FoxM1可增加K562細胞對HHT的藥物敏感性；FoxM1 siRNA組c-myc和Sp1表達顯著降低，表明FoxM1可正性調控c-myc和Sp1表達。
　　結論：①證實FoxM1可通過靶向調控BCL2促進AML發(fā)生發(fā)展，干預FoxM1表達可抑制細胞增殖并促進細胞凋亡，提示FoxM1是治療AML的潛在靶標。②HHT可以抑制白血