葛根芩連湯發(fā)酵液對(duì)T2DM大鼠降糖降脂作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的：
　　旨在進(jìn)行葛根芩連湯發(fā)酵液的降糖降脂相關(guān)藥效學(xué)及機(jī)理研究，揭示經(jīng)發(fā)酵技術(shù)處理后的葛根芩連湯和傳統(tǒng)葛根芩連湯在治療糖尿病藥效學(xué)作用的變化，從而考察其作用機(jī)理及發(fā)酵技術(shù)對(duì)葛根芩連湯的增效作用。
　　方法：
　　SD大鼠隨機(jī)選取其中10只喂飼常規(guī)飼料作為正常對(duì)照組，其余喂飼高糖高脂飼料4周后，空腹腹腔注射STZ溶液35mg/kg。將造模成功的T2DM大鼠隨機(jī)分為5組，分別為模型對(duì)照組、陽性藥對(duì)照組、葛根芩連湯水煎液

2、組（GGQLT水煎液組）、葛根芩連湯煮散劑組（GGQLT煮散劑組）、葛根芩連湯發(fā)酵液組（GGQLT發(fā)酵液組），均喂飼高糖高脂飼料，分別灌胃給藥，持續(xù)8周，觀察大鼠一般情況，每周監(jiān)測(cè)體質(zhì)量及空腹血糖（FBG）。末次給藥后，各組動(dòng)物禁食12h，以5％水合氯醛腹腔注射麻醉，開腹。
　　1.采血，分離血清，測(cè)定總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、空腹胰島素（FINS）水平

3、，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（ISI）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。
　　2.取大鼠胰腺組織，固定，切片做HE染色及免疫組化染色，光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化及胰島素的表達(dá)。取大鼠肝臟組織，固定，切片做HE染色，光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。
　　3.血清測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、過氧化氫酶（CAT）活性、谷胱甘肽過氧化氫酶（GSH-px）活性。
　　4.取新鮮骨骼肌組織，Western blo

4、t法檢測(cè)骨骼肌磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（GLUT4）表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況及血清生化指標(biāo)
　?。?）一般情況：給藥后，GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組、GGQLT發(fā)酵液組隨著時(shí)間推移，精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，活動(dòng)次數(shù)增加，尿量逐漸減少。
　?。?）體質(zhì)量：給藥后，至第7周，GGQLT發(fā)酵液組大鼠體質(zhì)量顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05）；第8周，GGQ

5、LT煮散劑組、GGQLT發(fā)酵液組體質(zhì)量顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）。
　?。?）FBG：給藥后，至第4周，GGQLT水煎液組及GGQLT發(fā)酵液組大鼠FBG顯著低于模型對(duì)照組（P<0.05）；第6周，給藥組FBG均顯著低于模型對(duì)照組（P<0.05）；第8周，給藥組FBG均顯著低于模型對(duì)照組（P<0.01），其中GGQLT發(fā)酵液組 FBG低于陽性對(duì)照藥，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）血脂系列：GGQLT水煎

6、液組、GGQLT煮散劑組、GGQLT發(fā)酵液組TC、TG、LDL-C水平均顯著低于模型對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）；GGQLT煮散劑組、GGQLT發(fā)酵液組HDL-C水平均顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05， P<0.01）；GGQLT發(fā)酵液組 TC水平顯著低于陽性對(duì)照藥、GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組（P<0.05，P<0.01）；GGQLT發(fā)酵液組TG水平顯著低于GGQLT水煎液組（P<0.05）；GGQLT發(fā)酵液組HDL

7、-C水平顯著高于陽性對(duì)照藥、GGQLT水煎液組（P<0.05，P<0.01）；葛根芩連湯發(fā)酵液LDL-C水平顯著低于GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組（P<0.05，P<0.01），其藥效接近陽性對(duì)照藥。
　?。?）FINS、ISI、HOMA-IR：GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組、GGQLT發(fā)酵液組FINS、HOMA-IR均顯著低于模型對(duì)照組（P<0.01）；GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組及 GGQLT發(fā)酵液組

8、 ISI顯著高于模型對(duì)照組（P<0.01）。GGQLT發(fā)酵液組 FINS水平顯著低于陽性藥對(duì)照組、GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組（P<0.01）；GGQLT發(fā)酵液組HOMA-IR顯著低于GGQLT水煎液組（P<0.05）。
　　2.組織形態(tài)學(xué)變化
　?。?）胰腺：各給藥組與模型對(duì)照組比較，胰島結(jié)構(gòu)較完整，邊界較清晰，胰島體積增大，萎縮程度有好轉(zhuǎn)，胰島數(shù)目增加。胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)有所增加，排列較為均勻，胞漿較模型對(duì)照組增加，

9、外分泌部脂肪樣變不明顯。尤以陽性藥對(duì)照組及GGQLT發(fā)酵液組改善程度較明顯。免疫組化結(jié)果顯示：給藥組的胰島β細(xì)胞數(shù)量較模型對(duì)照組有所增加，胰島素染色陽性的β細(xì)胞數(shù)量占總β細(xì)胞數(shù)量的比例較模型對(duì)照組有所增加。給藥組胰島素IOD值顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05或P<0.01），GGQLT發(fā)酵液組胰島素 IOD值顯著高于GGQLT水煎液組（P<0.05），GGQLT發(fā)酵液組胰島素IOD與陽性藥對(duì)照組接近，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）肝

10、臟：各給藥組與模型對(duì)照組比較，無脂肪樣變，氣球樣變及炎性細(xì)胞明顯減少，肝細(xì)胞萎縮現(xiàn)象仍然存在，但除GGQLT水煎液組較為明顯外，其余各組肝細(xì)胞數(shù)目及形態(tài)逐漸恢復(fù)正常，且有再生修復(fù)現(xiàn)象，尤以GGQLT發(fā)酵液組改善明顯。
　　3.氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)
　?。?）GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組及GGQLT發(fā)酵液組SOD活性顯著高于模型對(duì)照組（P<0.01）；GGQLT發(fā)酵液組SOD活性顯著高于陽性藥對(duì)照組、GGQLT水煎液組、

11、GGQLT煮散劑組（P<0.05，P<0.01）。
　?。?）GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組及GGQLT發(fā)酵液組MDA含量顯著低于模型對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）；GGQLT煮散劑組及GGQLT發(fā)酵液組MDA含量低于陽性藥對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　（3）GGQLT煮散劑組CAT活性顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05）；GGQLT水煎液組及GGQLT發(fā)酵液組CAT活性均有升高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

12、r>　?。?）GGQLT水煎液組、GGQLT煮散劑組及GGQLT發(fā)酵液組GSH-px活性較模型對(duì)照組有升高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.相關(guān)蛋白含量
　?。?）GGQLT發(fā)酵液組GLUT4蛋白表達(dá)量顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05， P<0.01）；GGQLT發(fā)酵液組上調(diào)GLUT4蛋白表達(dá)的作用更接近陽性藥對(duì)照組。
　?。?）GGQLT煮散劑組及GGQLT發(fā)酵液組p-p38蛋白表達(dá)量顯著高于模型對(duì)照組（P<0.0

13、5，P<0.01）；GGQLT發(fā)酵液組p-p38蛋白表達(dá)量顯著高于GGQLT水煎液組（P<0.05）；GGQLT發(fā)酵液組上調(diào)p-p38蛋白表達(dá)的作用優(yōu)于陽性藥對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.葛根芩連湯發(fā)酵液能夠改善T2DM大鼠一般情況，緩解體質(zhì)量減輕，調(diào)節(jié)糖脂代謝異常，增加胰島素敏感性，改善IR。
　　2.葛根芩連湯發(fā)酵液可以保護(hù)胰腺及肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)，促進(jìn)胰島素分泌。
　　3.葛根芩連湯發(fā)酵液可以