反相高效液相-PDA法測定蟲紋東方魨（Takifugu vermicularis）肝臟中的河豚毒素.pdf

1、河豚毒素(Tetrodotoxin簡寫為 TTX)是一種存在于河豚魚體和其他生物體內(nèi)海洋性神經(jīng)毒素，主要的檢測方法為HPLC法和小鼠生物法。 HPLC法檢測TTX，樣品的前處理是方法成功的關(guān)鍵。主要涉及提取和純化過程中的回收率和除雜效果。以往的文獻(xiàn)報(bào)道中，河豚魚組織中的TTX經(jīng)醋酸溶液提取后，首先以吸附性很強(qiáng)的物質(zhì)來除去提取液中的雜質(zhì)，然后過截留分子量為1000 的超濾膜或Bio-Gel P-2分子篩層析柱去除大分子物質(zhì)，上陽離

2、子交換樹脂2-3遍吸附河豚毒素和部分去除氨基酸和糖類等雜質(zhì)，酸洗脫液冷凍干燥。最終樣品是得到很好的凈化，但回收率過低，較難用于HPLC法的TTX定量分析。本次實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的純化條件進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)D152型大孔弱酸性陽離子交換樹脂洗脫條件和C18固相萃取小柱的凈化作用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)5％醋酸洗脫D152型離子交換樹脂對(duì)肝臟提取液中的總糖(苯酚-濃硫酸法)和氨基酸(茚三酮比色法)去除率分別達(dá)到86.4％和62.O％，對(duì)TTX的回收率為97.5

3、％。SPE C18柱經(jīng)pH 3.0的醋酸溶液酸化后，對(duì)TTX的回收率達(dá)95.3％，RSD為2.16％，并除去了D152型離子交換樹脂酸洗脫濃縮液中的色素，經(jīng)HPLC法驗(yàn)證，TTX峰與周圍雜質(zhì)分離良好，基質(zhì)大大減少，回收率亦令人滿意，達(dá)到了預(yù)期純化效果。 本次實(shí)驗(yàn)我們?cè)趪鴥?nèi)首次建立以庚烷磺酸鈉離子對(duì)磷酸緩沖鹽為流動(dòng)相，聯(lián)合PDA檢測的反相高效液相色譜方法定量分析蟲紋東方豚肝臟中的河豚毒素。方法：WATERS600E液相系統(tǒng)，PDA

4、996二極管矩陣檢測器；色譜柱Hypersil BDS C18(i.d 4.6×250mm 5 μ m，大連依利特公司)；流動(dòng)相O.05mOl/LNaH<,2>PO<,4>：0.05mol／LNa<,2.HPO<,4>=1:l(v/v)，庚烷磺酸鈉離子對(duì)5mmol/L；流速O.6ml/min：檢測波長205nm;柱溫20℃；進(jìn)樣量20μL。樣品處理：肝臟勻漿，用2倍乙酸溶液浸提，提取液煮沸去蛋白和乙醚除脂肪，然后以0.8ml/min流經(jīng)