海藻希瓦氏菌發(fā)酵產(chǎn)生河豚毒素的提取與檢測(cè).pdf

1、近年來，河豚毒素的微生物起源越來越得到人們的認(rèn)可。海洋微生物發(fā)酵法產(chǎn)生河豚毒素，具有原料來源廣、成本低，不受季節(jié)和原料的限制，不破壞生態(tài)平衡的特點(diǎn)，因此人們期望通過細(xì)菌發(fā)酵實(shí)現(xiàn)資源的有效利用和河豚毒素的大量生產(chǎn)。國(guó)外早在上世紀(jì)80年代就已經(jīng)著手此項(xiàng)研究，并且取得了驕人的成績(jī)。而我國(guó)在這方面的研究還很薄弱。 海藻希瓦氏菌最早于1985年由Yuichi Kotati等人從紅藻(Jania sp.)表面分離出來，當(dāng)時(shí)被命名為OK-1T

2、(T=type strain)，研究發(fā)現(xiàn)OK-1T與腐敗希瓦氏菌有很多相似的生理、生化特征，而且可以產(chǎn)生河豚毒素。本論文目的在于從結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能上證實(shí)，海藻希瓦氏菌發(fā)酵產(chǎn)生的TTX與河豚組織中的TTX是一致的，為TTX微生物起源假說奠定堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。優(yōu)化海藻希瓦氏菌生產(chǎn)河豚毒素的發(fā)酵條件，細(xì)致研究海藻希瓦氏菌產(chǎn)生河豚毒素的分離純化工作，為可持續(xù)生產(chǎn)TTX提供新思路。 本文對(duì)海藻希瓦氏菌生理生化指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定。通過測(cè)定菌體密度

3、和菌體收獲量，研究了部分初始條件及添加不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)海藻希瓦氏菌生長(zhǎng)的影響，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)海藻希瓦氏菌生產(chǎn)河豚毒素的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。優(yōu)化后的培養(yǎng)基最佳配方為：在2216E培養(yǎng)基中添加1.0％葡萄糖、2.5％酵母粉、1.0％磷酸高鐵。統(tǒng)計(jì)分析，葡萄糖是影響海藻希瓦氏菌菌體收獲量的主要因素。采甩SCM杯式超濾系統(tǒng)對(duì)海藻希瓦氏菌發(fā)酵液的過濾除雜進(jìn)行了研究，考察了操作壓力對(duì)過濾效果的影響，同時(shí)還針對(duì)料液的預(yù)處理對(duì)超濾結(jié)果的影響進(jìn)

4、行了研究，主要措施是調(diào)節(jié)料液pH值，改變其溫度，在其中添加混凝劑。結(jié)果表明，操作壓力為0.2MP，通量達(dá)到最大，截留率也相對(duì)較大。料液的pH調(diào)至4，加熱料液的溫度至60℃都能使通量和截留率達(dá)到較滿意的水平。研究發(fā)現(xiàn)在料液中添加50mg/L硫酸鋁混凝劑能有效減緩超濾膜污染。本文還考查了分子篩去除分子量較小的雜質(zhì)的效果，其中蛋白去除率50.8％，有機(jī)物去除率82.8％?？疾榱巳跛嵝躁栯x子交換樹脂D152對(duì)TTX的凈化作用，結(jié)果顯示，除色效果