腐敗希瓦氏菌噬菌體的性質(zhì)和防腐應(yīng)用研究.pdf

1、我國(guó)水產(chǎn)品資源豐富，種類繁多，是世界上較大的水產(chǎn)品養(yǎng)殖和貿(mào)易大國(guó)之一。近年來(lái)，隨著人們生活水平的日益提高，水產(chǎn)品因其低脂肪、高蛋白的特點(diǎn)越來(lái)越受到人們的歡迎。隨之而產(chǎn)生的是，人們對(duì)水產(chǎn)品的鮮度要求也越來(lái)越高。微生物的生長(zhǎng)和代謝是水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的主要原因。水產(chǎn)品中只有部分微生物參與腐敗，這些細(xì)菌就叫做該水產(chǎn)品的特定腐敗菌，抑制水產(chǎn)品特定腐敗菌的生長(zhǎng)可以有效防止水產(chǎn)品的腐敗。
　　 噬菌體是一類能夠感染細(xì)菌的病毒，體積微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單

2、，主要由蛋白質(zhì)衣殼和內(nèi)部包裹的核酸組成。噬菌體具有嚴(yán)格的寄生性，廣泛分布于自然界，能夠?qū)Ｒ恍缘牧呀饧?xì)菌，安全性好，對(duì)機(jī)體及環(huán)境無(wú)毒副作用。已有先例將噬菌體用于食品的貯存。
　　 本論文首先從污水中分離一株腐敗希瓦氏菌噬菌體并對(duì)其生理特性進(jìn)行研究，然后研究分離得到的腐敗希瓦氏菌噬菌體的抑菌活性及理化因素對(duì)噬菌體抑菌活性的影響，最后研究腐敗希瓦氏菌噬菌體對(duì)4℃冷藏牙鲆的防腐性能。主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1以腐敗希瓦氏菌S

3、p225為宿主菌從污水中分離了一株腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001，該噬菌體裂解性好，能夠在4-5 h內(nèi)使腐敗希瓦氏菌菌懸液變澄清，經(jīng)雙層平板法檢測(cè)得到清晰透明的噬菌斑。對(duì)該噬菌體的生理特性研究可知該噬菌體核酸類型為DNA，其形態(tài)符合長(zhǎng)尾噬菌體科的基本特征，為蝌蚪形，具有寬度約為50 nm的正多邊形頭部和長(zhǎng)約150 nm的尾部。該噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)為10，一步生長(zhǎng)曲線顯示噬菌體感染宿主菌潛伏期為10 min，爆發(fā)期為20 min，裂解量

4、為98。
　　 2對(duì)腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，以培養(yǎng)基和魚(yú)肉湯為基質(zhì)時(shí)，噬菌體Spp001均能抑制腐敗希瓦氏菌Sp225的生長(zhǎng)，保持基質(zhì)澄清。以培養(yǎng)基為基質(zhì)時(shí)，濃度為102pfu/mL的噬菌體Spp001不能完全抑制腐敗希瓦氏菌的生長(zhǎng)，基質(zhì)OD600nm緩慢上升，細(xì)菌緩慢生長(zhǎng)；以魚(yú)肉湯為基質(zhì)時(shí)，濃度為106pfu/mL和107pfu/mL的噬菌體均能抑制腐敗希瓦氏菌的生長(zhǎng)，而保持魚(yú)肉湯基質(zhì)的澄清。溫度對(duì)噬菌體抑

5、菌活性有影響，腐敗希瓦氏菌噬菌體40℃作用60min存活率為79.2％，60℃作用60 min后效價(jià)仍達(dá)到8.0×104pfu/mL，溫度大于70℃噬菌體失去裂解活性。腐敗希瓦氏菌噬菌體在pH為7時(shí)抑菌活性最高，此時(shí)效價(jià)為1.6×108 pfu/mL；噬菌體耐堿性較好，耐酸性較差，在pH為3時(shí)，噬菌體己失去裂解性。腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001對(duì)含氯消毒劑氯胺和次氯酸鈉具有較強(qiáng)的抗失活能力。10 mg/L-20.mg/L的氯胺僅能使噬菌

6、體的活性降低3％，1 g/L-2g/L能使噬菌體的活性降低約12.5％，500 mg/L-600 mg/L次氯酸鈉能夠滅活腐敗希瓦氏菌噬菌體12.5％，5 g/L-6g/L次氯酸鈉能夠滅活腐敗希瓦氏菌噬菌體22.1％。3 KGray電子束輻照使噬菌體效價(jià)和抑菌活性稍有降低，存活率為96.5％，5 KGray電子束輻照明顯降低了腐敗希瓦氏菌的效價(jià)和抑菌活性，存活率為21.5％，當(dāng)輻照劑量大于7 KGray時(shí)，噬菌體Spp001失去抑菌活性

7、。
　　 3腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001對(duì)冷藏牙鲆的抑菌防腐實(shí)驗(yàn)效果明顯。感官鑒定明顯看出噬菌體抑菌防腐效果良好，明顯高于未經(jīng)噬菌體處理的對(duì)照組。通過(guò)對(duì)微生物指標(biāo)的測(cè)定可知，腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001實(shí)驗(yàn)組和山梨酸鉀溶液實(shí)驗(yàn)組的菌落總數(shù)和腐敗希瓦氏菌菌落總數(shù)均明顯低于對(duì)照組，并且高濃度Spp001噬菌體實(shí)驗(yàn)組菌落總數(shù)和腐敗希瓦氏菌菌落總數(shù)均小于山梨酸鉀溶液實(shí)驗(yàn)組。噬菌體Spp001實(shí)驗(yàn)組和山梨酸鉀實(shí)驗(yàn)組的pH先降低后升高的

8、趨勢(shì)比對(duì)照組緩慢很多，且實(shí)驗(yàn)組pH的變化趨勢(shì)由大到小分別為高濃度的噬菌體Spp001實(shí)驗(yàn)組>山梨酸鉀溶液實(shí)驗(yàn)組>低濃度的噬菌體Spp001實(shí)驗(yàn)組。對(duì)魚(yú)肉揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定表明，實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組，且高濃度噬菌體實(shí)驗(yàn)組和山梨酸鉀實(shí)驗(yàn)組在第十四天仍小于30 mg/100g，表明高濃度噬菌體處理的魚(yú)肉未發(fā)生腐敗。
　　 本實(shí)驗(yàn)分離得到的一株腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001，裂解能力較強(qiáng)，且對(duì)理化性質(zhì)的耐受力較強(qiáng)，將噬菌體Spp001應(yīng)