黃海希瓦氏菌膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、刺參富含刺參粘多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、刺參皂苷等營養(yǎng),由于其較高的經(jīng)濟(jì)價值與營養(yǎng)價值,我國刺參養(yǎng)殖規(guī)模增長迅速,但是養(yǎng)殖模式的不夠成熟及生產(chǎn)過程中的不規(guī)范操作,刺參病害問題日漸突出,其中由細(xì)菌感染引起的化皮病是當(dāng)前養(yǎng)殖刺參中最常見、危害最為嚴(yán)重的疾病。該病存在明顯的病原多樣性和地區(qū)差異,黃海希瓦氏菌(Shewanella smarflavi)是引起遼寧刺參化皮病的重要病原菌,導(dǎo)致養(yǎng)殖過程中刺參大量死亡,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重危害刺參養(yǎng)殖

2、業(yè)的發(fā)展。水產(chǎn)養(yǎng)殖中針對水生動物疾病的爆發(fā)無非就是要做到快速、準(zhǔn)確的診斷,而通常病原菌引起大規(guī)模疾病的爆發(fā)都有一段潛伏期,在這段時間內(nèi),動物本體往往沒有太明顯的癥狀,這就造成了疾病確診的延誤,從而耽誤了疾病治療的最佳時機(jī)。目前針對黃海希瓦氏菌檢測的生理生化方法、分子生物學(xué)鑒定法及ELISA法都不同程度需要專業(yè)操作技術(shù)人員且耗時過久,在基層無法操作檢測,為了達(dá)到疾病早期確診,這就要求一種快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測方法。
　　膠體金免疫層

3、析技術(shù)(GICA)是一種以膠體金為標(biāo)記物的快速免疫結(jié)合分析技術(shù),通過該技術(shù)建立的試紙條是一種新型體外檢測工具,具有簡便快速、肉眼判斷、放大反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),能極大滿足基層現(xiàn)場檢測黃海希瓦氏菌的所有要求,無需專業(yè)人員即可定期進(jìn)行檢測,從而達(dá)到對病原菌感染養(yǎng)殖動物引起疾病起到良好的監(jiān)測作用。本研究前期先行制備抗黃海希瓦氏菌單克隆抗體及多克隆抗體,為試紙條的研制準(zhǔn)備材料,應(yīng)用雙抗夾心法建立了檢測黃海希瓦氏菌的GICA方法,對膠體金標(biāo)記單抗、抗體噴涂

4、等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化,并確定了最佳條件,成功研制了黃海希瓦氏菌膠體金免疫層析試紙條。
　　本研究所研制的試紙條對黃海希瓦氏菌進(jìn)行檢測,5~10min肉眼即可判讀結(jié)果,檢測靈敏度達(dá)到105CFU/mL,最佳檢測濃度為5×105~5×106CFU/mL。試紙條分別對兩個濃度5×105、5×107CFU/mL的希瓦氏菌(KCCM41821)、遲鈍愛德華菌(ATCC15947)、殺鮭氣單胞菌(MT004)、河豚鏈球菌(KCTC3657)、哈