Pleiotrophin在兩種胰腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　研究PTN（Pleiotrophin，多效生長(zhǎng)因子）在胰腺癌細(xì)胞株Miapaca-2和Capan-1中的表達(dá)情況，利用免疫熒光技術(shù)、Q-PCR、Western blot法檢測(cè)PTN mRNA和蛋白的表達(dá)，從而篩選較穩(wěn)定的高表達(dá)細(xì)胞系，為后期建立小鼠原位胰腺癌模型并通過(guò)干擾原位胰腺癌中PTN蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證PTN與其受體結(jié)合是否激活相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路在胰腺癌神經(jīng)浸潤(rùn)發(fā)生中的作用提供科學(xué)依據(jù)。PTN可作為潛在的藥物作用

2、靶點(diǎn)，進(jìn)一步對(duì)相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行干預(yù)，抑或體外合成相應(yīng)的PTN抑制劑，從而達(dá)到下調(diào)PTN或完全抑制的目的，阻止腫瘤的進(jìn)一步生長(zhǎng)及胰腺癌神經(jīng)浸潤(rùn)的發(fā)生，為胰腺癌的早期診斷、分期及治療尋找新途徑提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　用DMEM及1640培養(yǎng)液對(duì)Miapaca-2和Capan-1細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，利用Q-PCR法和Western blot方法檢測(cè)PTN mRNA和蛋白在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，并采用免疫熒光

3、化學(xué)法檢測(cè)PTN在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)位置。
　　結(jié)果：
　　Q-PCR結(jié)果顯示，PTN mRNA在MIA PaCa-2細(xì)胞中表達(dá)明顯較高，且與Capan-1細(xì)胞相比，MIA PaCa-2中PTN mRNA表達(dá)量為Capan-1的1.193倍。Western blot結(jié)果顯示：目的蛋白PTN的分子量大小約為19KDa，內(nèi)參GAPDH蛋白大小為36KDa。然后應(yīng)用Image J軟件進(jìn)行半定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PTN蛋白在MIA P

4、aCa-2和Capan-1細(xì)胞均有表達(dá)，且與Capan-1相比，MIA PaCa-2細(xì)胞系中PTN蛋白的表達(dá)更加明顯。免疫熒光結(jié)果顯示PTN的陽(yáng)性表達(dá)呈紅色顆粒，主要定位于胞漿，部分胞核亦可見(jiàn)陽(yáng)性著色。隨后我們將Q-PCR、Western blot、免疫熒光結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明胰腺癌細(xì)胞中PTN在mRNA及蛋白水平表達(dá)具有一致性。
　　結(jié)論：
　　MiaPaCa-2細(xì)胞中PTN mRNA和蛋白均呈更高表達(dá)，主要定位于胞漿中