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文檔簡介
1、目的和意義: 一氧化氮(NO)是炎癥反應過程中的重要介質(zhì)和調(diào)節(jié)因子,它雖可殺滅侵入機體的病原微生物,維持機體正常的免疫防御功能,但過量NO也對宿主細胞產(chǎn)生損傷作用。體內(nèi)NO生成的唯一途徑是由一氧化氮合酶(iNOS)催化L-精氨酸合成。研究證明,脂多糖(LPS)等刺激因子能誘導單核巨噬細胞高表達iNOS,從而合成過量NO,引起一系列嚴重病理反應,如感染性休克和多器官功能衰竭(MOF)等。因此抑制iNOS的過量表達以控制NO的產(chǎn)生,
2、對臨床相關疾病的治療具有重要意義。鑭是一種具有多種生物學活性的稀土元素,前期研究已證實鑭具有結合LPS抑制LPS生物學效應的作用,本研究進一步探討鑭對LPS誘導的小鼠巨噬細胞產(chǎn)生NO的影響,同時觀察鑭對iNOS基因轉(zhuǎn)錄的重要調(diào)控因子-核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)活化的可能影響,以探討鑭影響iNOS表達的可能機制,為研究NO拈抗劑及開發(fā)稀土的藥用價值提供實驗依據(jù)。 研究內(nèi)容和方法: 1.通過MTT法觀察不同濃度氯化鑭(L
3、aCl3)(2.5μmol/L~40μmol/L_)對小鼠巨噬細胞生長活性的影響。 2.采用免疫熒光細胞化學染色、Western Blotting及RT-PCR方法觀察LaCl3對LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOS蛋白及基因表達的影響,同時觀察NO產(chǎn)物的變化。 3.采用免疫熒光細胞化學染色及Western Blotting方法觀察LaCl3對LPS活化小鼠巨噬細胞NF-κB的影響。 結果: 1.一定濃度的L
4、aCl3(2.5~40μmol/L)對小鼠巨噬細胞的活性無明顯影響。 2.免疫熒光細胞化學染色及Western Blotting結果顯示低濃度的LaCl3(2.5μmol/L)能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOS的蛋白表達,而對正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞iNOS蛋白表達無明顯影響。 3.RT-PCR結果顯示LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOSmRNA的表達,而對正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞iNOSmRNA表達
5、無明顯影響。 4.NO含量測定結果顯示LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞產(chǎn)生NO。 5.NF-kB/p65活化狀況檢測結果顯示,LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞NF-kB/p65核轉(zhuǎn)位,而對正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞NF-kB/p65活性無明顯影響。 結論: 1.LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOS基因及蛋白的表達,從而顯著降低NO的分泌水平。 2.LaCl3可能
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