補陽還五湯對急性腦缺血再灌注大鼠血小板PI3K-Akt通路的作用研究.pdf

1、目的：
　　研究補陽還五湯預處理對急性腦缺血再灌注損傷大鼠血小板活化作用及對血小板蛋白Akt Ser473、Akt Thr308、PDK1的影響，初步探討補陽還五湯抗血小板活化作用與PI3K/Akt信號通路的聯(lián)系。
　　方法：
　　將84只雄性SD大鼠隨機分為7組，分別為補陽還五湯A、B、C組(29.69，14.84，7.42g/kg)，硫酸氫氯吡格雷組（7.81×10-3g/kg），腦梗塞模型組，假手術(shù)對照組，空白對

2、照組。各用藥組大鼠分別給予相應劑量藥物連續(xù)灌胃給藥14天，其余組予等量蒸餾水灌胃。14天后補陽還五湯各組，硫酸氫氯吡格雷組，模型組采用線栓法建立大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO)再灌注損傷模型，假手術(shù)組僅結(jié)扎單側(cè)頸總動脈。缺血2h再灌注6h后根據(jù)大鼠行為學表現(xiàn)進行神經(jīng)功能缺損評分，然后處死大鼠提取相應標本用于后續(xù)檢測。
　　研究內(nèi)容
　　1.大鼠清醒后，參照Zea-Longa的五級四分評分法進行神經(jīng)功能缺損評分。
　　2.

3、處死大鼠提取腦組織均勻切成每2mm一片，用2％氯化三苯基四氮唑(TTC)染色后用4％多聚甲醛固定24h。用數(shù)碼相機拍取照片后，使用Image-Pro plus圖像分析軟件處理，計算大鼠腦梗死面積百分比。大鼠腦梗死面積百分比=各切面梗死面積之和/各切面面積之和×100％。
　　3.應用ELISA檢測血漿中sCD40L水平，流式細胞術(shù)(FCM)測定全血中血小板活化標志物CD62P的表達變化情況，探討補陽還五湯抑制血小板活化的作用。

4、r>　　4.采用蛋白免疫印跡法(Western Bloting)半定量檢測富血小板血漿中PI3K/Akt血小板活化通路中Akt Ser473、Akt Thr308、PDK1等關鍵蛋白表達的變化。
　　結(jié)果：
　　1.與假手術(shù)組及空白組比較，模型組神經(jīng)功能缺損評分及腦梗死面積比明顯升高(P＜0.01);與模型組比較，補陽還五湯各組及硫酸氫氯吡格雷組神經(jīng)功能缺損評分及腦梗死面積比明顯降低(P＜0.05）。
　　2.空白組血

5、漿中sCD40L及血小板CD62P明顯低于其他各組(P＜0.05或P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組sCD40L及CD62P明顯升高(P＜0.05或P＜0.01);與模型組比較，補陽還五湯各組及硫酸氫氯吡格雷組均明顯降低血漿sCD40L及血小板CD62P的表達(P＜0.05或P＜0.01)。
　　3.與假手術(shù)組比較，模型組Akt Ser473、Akt Thr308、PDK1蛋白磷酸化水平顯著升高(P＜0.01)，而補陽還五湯各

6、組及硫酸氫氯吡格雷組Akt Ser473、Akt Thr308、PDK1蛋白磷酸化水平明顯低于模型組(P＜0.05或P＜0.01)。
　　4.補陽還五湯A、B、C(29.69，14.84，7.42g/kg)不同濃度組對急性腦缺血再灌注大鼠的抗血小板活化及調(diào)控PI3K/Akt通路關鍵蛋白的作用均未呈現(xiàn)明顯的量效關系(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.補陽還五湯預處理明顯減輕急性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺損行為表現(xiàn)，并