VVC患者臨床分離白念珠菌Mrr2、CDR1與氟康唑耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、目的：⑴了解本地VVC患者念珠菌感染的菌種分布情況及其對(duì)FCA的敏感性；⑵探討VVC患者臨床分離白念珠菌Mrr2突變與FCA耐藥的關(guān)系；⑶探討VVC患者臨床分離白念珠菌Mrr2、CDR1的mRNA表達(dá)水平與FCA耐藥的關(guān)系，并進(jìn)一步分析Mrr2與CDR1表達(dá)水平在FCA耐藥中的相互調(diào)控作用；⑷探討VVC患者臨床分離白念珠菌Mrr2基因突變與Mrr2的mRNA表達(dá)水平是否對(duì)FCA耐藥具有相互作用。
　　方法：采集2015年11月至2

2、016年5月山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚性病科就診的可疑VVC患者陰道分泌物標(biāo)本155份，并經(jīng)過(guò)真菌鏡檢、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基及API20C AUX念珠菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定，獲得102株念珠菌。對(duì)其中的80株白念珠菌應(yīng)用M27-A3微量肉湯稀釋方法進(jìn)行FCA藥物敏感性試驗(yàn)。對(duì)80株白念珠菌分別提取DNA、聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）擴(kuò)增Mrr2基因片段、測(cè)序，尋找突變位點(diǎn)。對(duì)白念

3、珠菌FCA耐藥組和敏感組菌株分別提取總 RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（Real-time Fluorescence Quantitative PCR，F(xiàn)Q-RT-PCR）檢測(cè)Mrr2、CDR1的mRNA表達(dá)量，并做相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：①?gòu)?55份陰道分泌物標(biāo)本中，共獲得念珠菌菌株102株。其中白念珠菌80株（78.4％），光滑念珠菌15株（14.7%），熱帶念珠菌4株（3.9%），近平滑念珠菌2株（2

4、.0%），克柔念珠菌1株（1.0%）。②對(duì)80株白念珠菌接種活化，并使用M27-A3微量肉湯稀釋法進(jìn)行FCA藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示：80株白念珠菌中有40株對(duì)FCA敏感，10株對(duì)FCA呈劑量依賴性敏感，30株對(duì)FCA耐藥，耐藥率為37.5%。③對(duì)80株白念珠菌的Mrr2基因進(jìn)行測(cè)序，其中FCA耐藥組Mrr2基因突變率為56.67%；FCA敏感組Mrr2基因突變率為26.08%。對(duì)白念珠菌Mrr2基因突變與FCA耐藥的關(guān)系采用四格表卡方

5、檢驗(yàn)，得出P值＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。耐藥組Mrr2基因突變率高于敏感組Mrr2的突變率。④檢測(cè)白念珠菌FCA敏感組和耐藥組的Mrr2及CDR1的mRNA表達(dá)水平，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：白念珠菌FCA耐藥組Mrr2的mRNA表達(dá)水平高于敏感組Mrr2的mRNA表達(dá)水平（1.10±0.50 VS0.52±0.45），P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；白念珠菌FCA耐藥組CDR1的mRNA表達(dá)水平高于敏感組CDR1的mRNA表達(dá)水平（0.4

6、2±0.294 VS0.25±0.289），P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CDR1與Mrr2呈正相關(guān)，r=37.6%；Mrr2突變與 Mrr2表達(dá)的交互作用分析，發(fā)現(xiàn)Mrr2基因發(fā)生突變且高表達(dá)組的耐藥性是基因未發(fā)生突變且基因低表達(dá)組的耐藥性的47.50倍，說(shuō)明Mrr2基因突變與高表達(dá)對(duì)FCA耐藥性的產(chǎn)生存在協(xié)同作用。
　　結(jié)論：⑴本地區(qū)VVC患者最主要的致病菌種是白念珠菌，對(duì)FCA耐藥率較高，臨床治療VVC應(yīng)依據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果