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文檔簡介
1、1.研究背景和目的:
白念珠菌是耳鼻咽喉科重要的病原真菌之一,隨著氟康唑等唑類抗真菌藥的廣泛使用,白念珠菌對唑類藥物的耐藥率不斷升高。為了尋找藥物新的作用靶點,深入耐藥機制的研究成為必然。既往多從基因和轉(zhuǎn)錄水平研究白念珠菌的耐藥機制,鑒于蛋白質(zhì)為生命活動的最終執(zhí)行者,本項目將從蛋白質(zhì)水平來探討白念珠菌對唑類藥物的耐藥相關蛋白。
2.研究方法:
以CLSIM27-A方案從一系列同一親本來源的16株
2、白念珠菌(CA-1~CA-9、CA-11~CA-17)中篩選白念珠菌氟康唑敏感株與耐藥株;以超聲裂解法聯(lián)合反復凍融法分別獲得氟康唑敏感與耐藥菌株的全組蛋白質(zhì);以二維聚丙烯酰胺凝膠電泳獲得氟康唑敏感與耐藥白念珠菌全組蛋白質(zhì)電泳圖譜;以ImageMaster2DPlatinum圖像分析系統(tǒng)分析兩組間差異表達蛋白質(zhì);以基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜鑒定差異表達的蛋白質(zhì);以白念珠菌、釀酒酵母菌基因數(shù)據(jù)庫及NCBI數(shù)據(jù)庫對鑒定的蛋白質(zhì)進行功能分
3、類并尋找蛋白質(zhì)與唑類耐藥的相關證據(jù)。
3.結果:
①氟康唑?qū)?6株白念珠菌的MIC80值范圍為0.25-64μg/ml,其中CA-3株的MIC80為3.2±1.1μg/ml,為氟康唑敏感株;CA-16株的MIC80為64.0±0.0μg/ml,為氟康唑耐藥株。此兩株菌為本研究對象。
②經(jīng)裂解液裂解法+液氮反復凍融法+超聲裂解法裂解白念珠菌,其細胞裂解率大于60%,蛋白質(zhì)濃度為9.9±0.7mg/
4、ml,且SDS-PAGE凝膠能清楚的分辨25KDa到250KDa分子量的蛋白質(zhì)。
③比較敏感和耐藥菌株全組蛋白點,共篩選了17個差異表達的蛋白質(zhì),氟康唑耐藥菌株CA-16有5種上調(diào)蛋白(Adh1p,Ynk1p,Cqr1p,Pst3p,Rdi1p)、10種下調(diào)蛋白(Aco1p,Acs2p,Asn1p,F(xiàn)um11p,Cdc19p,Bat21p,Srb1p,Ifr2p,Dut1p,Rps21p);多數(shù)蛋白質(zhì)涉及到糖酵解、發(fā)酵、乙
5、醛酸循環(huán)、三羧酸循環(huán)、呼吸功能等能量代謝過程。
④分析氟康唑敏感菌株CA-3發(fā)現(xiàn),氟康唑單獨誘導17個差異性表達的蛋白質(zhì)中Cqr1p、Adh1p2個蛋白質(zhì)上調(diào)。
4.結論:
①白念珠菌對氟康唑的耐藥性可能與其發(fā)酵功能的增強及糖酵解、三羧酸循環(huán)、呼吸功能和線粒體功能等受抑制有關。
②Adh1p、Cqr1p可能為白念珠菌重要的氟康唑耐藥相關蛋白,兩者可能具有關聯(lián)性。
③裂
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