白念珠菌藥物敏感性試驗及氟康唑相關(guān)耐藥基因點突變的研究.pdf

1、目的：了解白念珠菌對氟康唑和伊曲康唑的體外藥物敏感性。收集白念珠菌氟康唑耐藥株，檢測相關(guān)耐藥基因ERG11、TAC1、MRR1和UPC2的點突變，進一步了解ERG11、TAC1、MRR1和UPC2的點突變與唑類藥物耐藥之間的關(guān)系。
　　 方法：收集不同來源臨床標本，通過芽管形成試驗、顯色培養(yǎng)基和厚膜孢子試驗鑒定白念珠菌。采用M27-A2微量肉湯稀釋法，進行白念珠菌對氟康唑和伊曲康唑的體外藥物敏感性試驗。收集氟康唑耐藥株，采用尿素

2、裂解法提取DNA，PCR擴增及測序。對于ERG11，設(shè)計一對引物，測其全長；對于TAC1設(shè)計三對引物，分別包括5個點突變T225A、A736V、N972D、N977D和G980E；對于MRR1，設(shè)計兩對引物，分別包括2個點突變P683S和G997V；對于UPC2，設(shè)計一對引物，包括2個點突變A643T和G648D。將PCR產(chǎn)物送交商業(yè)測序。
　　 結(jié)果：共收集白念珠菌臨床株506株。白念珠菌對氟康唑的敏感率為99.21％(502

3、/506)，劑量依賴敏感率為0.20％(1/506)，耐藥率為0.59％(3/506)；對伊曲康唑的敏感率為43.28％(219/506)，劑量依賴敏感率為53.16％(269/506)，耐藥率為3.56％(18/506)；其中1株白念珠菌對氟康唑和伊曲康唑交叉耐藥。對于ERG11，11株白念珠菌氟康唑耐藥株的9株中檢測出了錯義突變導致的8種氨基酸置換(突變率81.82％)，分別是E266D(n=5)、D116E(n=3)、Y132H(

4、n=2)、G448E(n=2)、Y132F(n=1)、K143Q(n=1)、T229A(n=1)和G464S(n=1)。其中K143Q此前未見文獻報道。對于UPC2，11株菌中的2株檢測出了錯義突變導致的1種氨基酸置換(突變率18.18％)，G648D(n=2)。對于TAC1和MRR1，11株菌中均未檢測到相應(yīng)的點突變。
　　 結(jié)論：白念珠菌對唑類藥物有耐藥及交叉耐藥現(xiàn)象，伊曲康唑耐藥率高于氟康唑。但白念珠菌對氟康唑和伊曲康唑大