乙酰膽堿對(duì)小鼠嗅球神經(jīng)環(huán)路的調(diào)控作用.pdf

1、目的：乙酰膽堿是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)?；浊澳X膽堿能神經(jīng)元通過釋放乙酰膽堿來調(diào)節(jié)注意、學(xué)習(xí)和記憶等功能。主嗅球接受來自基底前腦斜角帶核水平支大量的膽堿能和GABA能離心纖維的投射，這一投射系統(tǒng)已經(jīng)被證明在嗅覺信息的處理和嗅覺記憶中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)表明乙酰膽堿影響動(dòng)物的嗅覺分辨和嗅覺記憶能力。但是，基底前腦斜角帶核水平支膽堿能神經(jīng)元對(duì)嗅球中神經(jīng)元以及神經(jīng)環(huán)路的調(diào)控作用仍然未知。近來研究發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默病等神經(jīng)

2、退行性疾病的患者早期多伴有膽堿能神經(jīng)元的損傷和嗅覺的減退缺失。因此，了解乙酰膽堿在嗅覺信息處理中所起的作用對(duì)探索神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制有一定的臨床意義。本文的主要目的是探索乙酰膽堿對(duì)嗅球內(nèi)部神經(jīng)環(huán)路的作用。
　　方法：通過腦立體定位注射，將腺相關(guān)病毒注射到小鼠的基底前腦，待病毒穩(wěn)定表達(dá)后，通過灌流取材和冰凍切片觀察膽堿能纖維在嗅球中的分布。采用離體腦片的膜片鉗記錄，制備厚度為300?m的嗅球腦片用于記錄。使用含有生物素的記錄電極

3、記錄位于嗅小球?qū)拥那蛑芗?xì)胞和僧帽細(xì)胞層的僧帽細(xì)胞，再利用給藥電極在細(xì)胞附近局部噴射乙酰膽堿等藥物。記錄完成之后，將腦片用4％ PFA固定，用Cy3的紅色二抗進(jìn)行免疫染色，用激光共聚焦顯微鏡掃描圖像，確定細(xì)胞形態(tài)和類型。所有的電生理數(shù)據(jù)用Clampex10.2軟件（Axon）進(jìn)行分析處理。
　　結(jié)果：膽堿能神經(jīng)纖維在嗅球各層都有投射，主要集中在嗅小球?qū)?。局部給予乙酰膽堿使表達(dá)VGAT的球周細(xì)胞自發(fā)放電和誘發(fā)放電頻率顯著增加，并產(chǎn)生內(nèi)

4、向電流，這一反應(yīng)可被mAChR的拮抗劑阿托品阻斷，突觸傳遞的阻斷劑不能消除該反應(yīng)。尼古丁則對(duì)球周細(xì)胞無此作用。乙酰膽堿還可通過激活mAChR使球周細(xì)胞接受的興奮性輸入的頻率增加。嗅球的投射神經(jīng)元僧帽細(xì)胞放電被乙酰膽堿抑制，這種抑制可被GABAA受體的阻斷劑和mAChR的拮抗劑阻斷。嗅球中另一類多巴胺能的球周細(xì)胞，其放電可被乙酰膽堿直接抑制。
　　結(jié)論:乙酰膽堿通過激活mAChR從而增加GABA能球周細(xì)胞的興奮性，這一興奮性的增加不