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文檔簡介
1、目的:
本課題主要研究黃荊子總木脂素的提取、純化工藝,并對其抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥效及安全性進(jìn)行了評價(jià)。
方法:
1.以總木脂素提取量為考察指標(biāo),在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用正交試驗(yàn)確定黃荊子總木脂素的最佳提取條件。
2.采用聚酰胺、D101大孔樹脂等純化黃荊子總木脂素,HPLC法測定總木脂素含量,并以純度和轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)綜合評價(jià),優(yōu)化黃荊子總木脂素純化工藝條件。
3.采用急性毒性試驗(yàn)以試藥最大耐
2、受劑量灌胃,給藥后連續(xù)觀察兩周,詳細(xì)記錄小鼠體重、行為活動、狀態(tài)、飲食、大便、小便、毛色、分泌物及死亡等情況。
4.采用Ⅱ型膠原蛋白誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎模型,對黃荊子總木脂素進(jìn)行體內(nèi)抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥理活性評價(jià)。
5.采用二甲苯致小鼠耳腫脹和醋酸扭體實(shí)驗(yàn),研究黃荊子總木脂素的抗炎鎮(zhèn)痛作用。6.采用HPLC法測定牡荊屬4種植物果實(shí)中黃荊子素VNL的含量。
結(jié)果:
1.黃荊子總木脂素最優(yōu)提取工藝:提取溶劑乙
3、醇濃度為70%,料液比為1:10,提取溫度75℃,回流提取60min,提取2次。
2.聚酰胺與D101大孔樹脂能有效富集總木脂素。最佳工藝條件為浸膏與聚酰胺拌樣比為1.5∶1,浸膏與聚酰胺填料比為2∶1,水洗后以35%乙醇洗脫,收集洗脫液6BV。D101大孔樹脂上樣液濃度為1.5mg/mL,最大上樣量11BV,蒸餾水洗脫體積8BV,洗脫溶劑為35%乙醇,洗脫體積8BV,純化后終產(chǎn)品中總木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為51.4%,轉(zhuǎn)移率為63.
4、4%,得率為2.0‰。
3.急性毒性實(shí)驗(yàn)中,動物無死亡,也無明顯中毒反應(yīng),測得黃荊子總木脂素最大試驗(yàn)藥物劑量為16g/kg(相當(dāng)于生藥量8000g生藥/kg),是人正常使用劑量的6400倍。
4.黃荊子總木脂素對大鼠II型膠原性關(guān)節(jié)炎具有顯著的治療作用,可以明顯地降低關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足容積和抑制足腫脹率;可以顯著地降低TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-17A水平(P<0.05),顯著抑制MMP-3和MMP
5、-9蛋白表達(dá)和COX-2和INOS蛋白酶表達(dá),抑制關(guān)鍵酶IkB和PDPK的磷酸化(P<0.05)且呈劑量依賴性;黃荊子總木脂素高中劑量均能顯著性提高大鼠血清中IL-10水平(P>0.05)。其高劑量組治療效果尤為突出,且給藥期間動物耐受性良好。
5.黃荊子總木脂素40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg劑量均能顯著抑制醋酸扭體模型小鼠的疼痛反應(yīng),抑制率分別為42.42%(p<0.01),30.27%(p<0.01),22
6、.16%(p<0.05);40mg/kg和20mg/kg劑量可顯著抑制二甲苯致小鼠耳腫脹炎癥反應(yīng),抑制率分別為35.63%(p<0.05),32.23%(p<0.05)。
6.黃荊子素的含量在牡荊屬4種植物果實(shí)中存在差異,其中以黃荊子和蔓荊子中含量較高。
結(jié)論:
本課題建立的黃荊子總木脂素提取、純化工藝穩(wěn)定性好,簡便易行,能夠富集到純度較高的黃荊子總木脂素。藥理結(jié)果表明黃荊子總木脂素具有顯著的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)
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