差異顯示法分離黑腹果蠅體色圖式相關(guān)基因.pdf

1、黑腹果蠅(Drosophilamelanogaster)作為遺傳學(xué)研究的經(jīng)典模式生物，其新突變體不斷被發(fā)現(xiàn)、記錄和研究。在黑腹果蠅突變體中包括很多體色表型發(fā)生變化的品系，近年來國內(nèi)外在該領(lǐng)域的探索日益加快。本實(shí)驗(yàn)室黑腹果蠅的自發(fā)突變品系黑條體(blackstreak，BSR)體色呈現(xiàn)復(fù)雜的性狀，由原來的背甲黑色(比已知黑檀體突變型略淺)分化為深黑、褐色和淺黃色。各體色品系雖然歷經(jīng)十余代的純化，后代中除了出現(xiàn)深黑外，仍然有褐色和淺黃色的出

2、現(xiàn)。 為了探討出現(xiàn)該復(fù)雜性狀的分子機(jī)制，本研究采用差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR(DDRT-PCR)技術(shù)比較黑條體突變體(BSR)與野生型黑腹果蠅(wildtype,WT)的基因差異表達(dá)，共得到6個(gè)差異表達(dá)片段。經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)一長為215bp的陽性片段RTCY04在黑條體突變體(BSR)中的表達(dá)水平明顯低于在野生型黑腹果蠅(WT)中的表達(dá)。將獲得的RTCY04片段采用單引物PCR擴(kuò)增技術(shù)，設(shè)計(jì)了三對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，逐段測序，

3、將重疊序列拼接。分別得到了844bp的WTRTCY04片段，804bp的BSRRTCY04片段，后者比前者缺失了40bp。通過Blastn檢索發(fā)現(xiàn)，以上拼接序列的部分序列與一未知功能的基因CG31007的序列重疊，而BSR中缺失的40bp片段位于基因CG31007mRNA3’端。 由于RTCY04片段的序列與未知功能基因CG31007重疊，因此通過對(duì)基因CG31007的功能進(jìn)行預(yù)測，可以初步分析陽性差異RTCY04片段的功能。本

4、研究采用生物信息學(xué)工具搜索到基因CG31007的蛋白質(zhì)序列中具有一個(gè)典型的一CHCH結(jié)構(gòu)域([coiledcoil1]-[helix1]-[coiledcoil2]-[helix2]domain)，預(yù)測與細(xì)胞色素C氧化酶的功能有關(guān)，基因命名為COX-R。另外還具有以下基序：3個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)，2個(gè)cAMP-蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)，3個(gè)酪蛋白激酶2磷酸化位點(diǎn)，5個(gè)N-端酰基化位點(diǎn)，1個(gè)天冬酰胺糖基化位點(diǎn)。其中，酪蛋白激酶2磷酸化位點(diǎn)與基