高羊茅內生真菌的分離、鑒定及其生物防治的初步研究.pdf

1、禾草內生真菌在寄主體內渡過全部或幾乎全部生活周期而不表現(xiàn)任何癥狀，與宿主互惠互利，提高宿主對生物脅迫(抗蟲、抗菌等)和非生物脅迫抗性的能力，使得共生體系具有較強的競爭力。禾草內生真菌產生豐富多樣的次生代謝產物，具有多種生物活性，對害蟲和植物病原菌起到抑制和滅殺作用，這些優(yōu)良特征能夠使內生真菌有望成為生物農藥。因此對禾草內生真菌在植物病害生物防治方面的研究不但具有經濟價值和生態(tài)學意義，還有現(xiàn)實的理論意義。 本文從高羊茅交戰(zhàn)II的植

2、物組織中分離內生真菌，利用形態(tài)學和分子生物學的方法對之鑒定，篩選內生真菌抑菌譜，并對抑菌機理做了研究，試驗結果如下： 1．高羊茅內生真菌的分離與鑒定 采用苯胺蘭染色法檢測多年生黑麥草和高羊茅部分商業(yè)品種的種子，高羊茅交戰(zhàn)II種子的內生真菌感染率最高，達到73[％]。 用組織搗碎的固液分離法從高羊茅交戰(zhàn)II植株分離得到6株白色菌株，通過組織印跡以及孢子滅活試驗證明所分離的菌株為內生的。 從形態(tài)學和分子生

3、物學兩方面鑒定6株內生真菌。6株真菌按形態(tài)劃分為2個菌群，菌l(J21、J22、J25、J26)電鏡掃描觀察孢子形狀為腎形，長約6.4-10μm，分子生物學鑒定采用AP-PCR的方法，在0.7，0.9，2.1kb左右出現(xiàn)條帶。菌II(J23、J24)電鏡掃描觀察分生孢子形狀為長卵形，4.1-7.2×1.2-1.5μm.，分子鑒定采用18SrDNA法，進行系統(tǒng)發(fā)育分析。 綜合形態(tài)學和分子生物學鑒定結果，菌Ⅰ為禾草內生真菌的優(yōu)勢菌株

4、Neotyphodium coenophialum，菌Ⅱ與Acremonium alternatum有非常高的相似性。本文首次從高羊茅株中分離得到Acremonium alternatum，Acremoniumalternatum-F.arundinace是一種新的穩(wěn)定的共生體系，這對于研究禾草及其內生真菌的共生體系提供了寶貴的資料。 2．6株內生真菌的生物學特征 對6株內生真菌利用碳源的能力做了初步研究，結果表

5、明6株菌可以利用果糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖等碳源MS改良培養(yǎng)基，生長良好。 牛奶石蕊試驗菌落周圍無明顯的透明圈，說明分離的內生真菌不具備水解蛋白的能力。 3．內生真菌抑菌譜試驗 抑菌譜的篩選發(fā)現(xiàn)6株內生真菌對核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)、番茄灰霉病原菌(Botrytis cinerea)、番茄晚疫病原菌(Phytophthora infestans)等植物致病菌

6、有一定的抑制作用。其中J24對核盤菌抗性較為明顯，與核盤菌之間有明顯的拮抗帶，寬為13ram，可以作為潛在的生防菌深入研究。 4．J24對核盤菌抗性的初步研究 采用玻璃紙條法研究J24寄生能力，J24不是核盤菌的寄生菌。J24難揮發(fā)性代謝產物的抑菌作用的研究(采用圓盤濾膜法)，發(fā)現(xiàn)可以抑制核盤菌菌絲生長，抑制率達到69％：平板上形成菌核的重量減少率為49.7％，菌核萌發(fā)率為69.2％。 上述研究表明J24對核盤菌