山葵內(nèi)生真菌的分離鑒定及防治墨入病的研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是一類具有重要價值的資源微生物，在促進農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和醫(yī)藥領域中具有廣闊的應用前景。試驗采用組織塊分離法分離山葵根、葉柄以及葉片中的內(nèi)生真菌，經(jīng)嚴格的表面消毒程序，共獲得29株內(nèi)生真菌。以形態(tài)學觀察結(jié)合分子生物學方法進行分類鑒定，并分析了不同部位內(nèi)生真菌的多樣性以及種群分布規(guī)律。通過平板對峙和抑制菌絲生長試驗篩選對山葵墨入病菌抑制率高的菌株，測定高活性菌株的生物學特性。在溫室和田間小區(qū)內(nèi)，通過噴霧處理進一步測定高活性菌株對

2、墨入病的防治效果。主要結(jié)果如下:
　　1、比較山葵葉、葉柄及根的表面消毒條件，我們得出，山葵的根用75％的酒精消毒30s，3.5％的NaClO消毒5min、山葵的葉和葉柄用75％的酒精消毒30s，3.5％的NaC1O消毒3min后，表面消毒效果最好，可獲得內(nèi)生真菌較好的分離效果。
　　2、通過顯微形態(tài)學和分子生物學方法，將山葵內(nèi)生真菌初步鑒定為6日、8科、8屬。從葉片中分離出內(nèi)生真菌13株，其中包括7個種屬，分別為Colle

3、totrichum sp.，Chaetomium sp.,Fusarium sp., Arthrinium sp.，Penicillium sp., Alternaria sp., Mucorsp.。從葉柄中分離出內(nèi)生真菌5株，其中包括3個種屬，分別為Fusarium sp.，Penicilliumsp.，Alternaria sp.。從根中分離到內(nèi)生真菌11株，其中包括6個屬，分別為Colletotrichumsp.,Chaetomi

4、um sp.，F(xiàn)usariumsp.,Penicillium sp.,Alternaria sp.,Xylaria sp.。采用4℃斜面保存以及-20℃甘油保存純培養(yǎng)物。
　　3、利用平板對峙培養(yǎng)，將所有分離物與山葵墨入病菌(Phoma wasabiae Yokogi)菌株進行拮抗性測定，結(jié)果得到對山葵墨入菌具有抑制作用的內(nèi)生真菌10株。其中，菌株SK26的抑菌半徑最大，為2.82cm。采用抑制菌絲生長法對初篩的10株拮抗內(nèi)生菌進

5、行復篩，結(jié)果測得菌株SK26發(fā)酵原液對山葵墨入病菌菌絲生長具有較強的抑制作用，抑制率達77.39％。結(jié)合培養(yǎng)形態(tài)特征和分子生物學分析，將菌株SK26初步鑒定為子囊菌亞門、核菌綱、球殼菌目、黑孢殼科中的球毛殼(chaetomium globosum)真菌。SK26發(fā)酵原液對熱處理和紫外照射處理具有很好的穩(wěn)定性，不耐酸堿，僅在中性偏酸環(huán)境下較為穩(wěn)定。溫室生防試驗結(jié)果表明:SK26拮抗內(nèi)生真菌的孢懸液對山葵墨入病的防治效果較好，防效為66.1

6、8％，SK26的發(fā)酵液對山葵墨入病的防治效果較差，僅為21.56％。田間小區(qū)試驗初步表明:田間施藥三次后SK26孢懸液對山葵墨入病的防效為57.21％，發(fā)酵液處理的防效29.87％。內(nèi)生真菌SK26不管是孢懸液還是發(fā)酵液在施藥后病情指數(shù)都有所上升，但較對照上升得不顯著，對墨入病的防治起到一定控制性的效果。
　　4、SK26菌株的基礎生物學特性研究表明，最適菌絲生長溫度為25℃，最適產(chǎn)孢溫度為30℃;最適菌絲生長pH為7，最適產(chǎn)孢P