山葵黑根病菌拮抗菌的篩選、鑒定及防治研究.pdf

1、山葵，屬十字花科多年生草本植物，產(chǎn)于日本富士山和臺灣阿里山，是生產(chǎn)芥末的主要原料，沿海人們喜食生魚片，以芥末為佐餐，被日本人民稱為生活必需品。美國，加拿大，澳洲也有出口，因此市場銷售量大。近年國外研究發(fā)現(xiàn)：山葵還具有殺菌防病、防腐利尿、發(fā)汗、清血、增進(jìn)食欲、減脂和軟化血管的功能，從而更增加了山葵的需求。因此，種植山葵有很好的經(jīng)濟(jì)社會效益。近年山葵已在大陸大量種植，我省青城、邛崍、雅安、樂山、綿陽、涼山等地區(qū)都建有種植基地，全國種植面積不

2、下數(shù)十萬畝。但其植株被一種黑根病感染，黑根病病原菌為一種絲狀真菌——墨入菌(Phoma wasabiae Yokogi)引起。凡感染黑根病的山葵其產(chǎn)值下降50％以上。 本研究用稀釋分離法對成都、簡陽、雅安等地區(qū)的農(nóng)田、自然保護(hù)區(qū)的13個土壤樣品進(jìn)行放線菌和細(xì)菌的分離，共分離到放線菌119株，細(xì)菌67株。以山葵墨入菌為供試菌，采用點對峙培養(yǎng)篩選法對分離到的101株放線菌，57株細(xì)菌進(jìn)行初篩，結(jié)果顯示，對山葵墨入菌具有拮抗活性的放線

3、菌38株，細(xì)菌10株。再通過打孔法復(fù)篩，得到產(chǎn)生抑菌圈最大的菌株SA2。 根據(jù)傳統(tǒng)的表型分類、生理分類，化學(xué)分類和現(xiàn)代16S rDNA序列分析的分子分類方法，即多相分類，對拮抗菌株SA2進(jìn)行形態(tài)特征，生理生化特征分析以及16S rDNA序列分析。SA2為產(chǎn)芽胞細(xì)菌，周身鞭毛，芽胞中生，橢圓形，菌呈短桿狀，菌體長1.9-2.8μm，寬0.6-1.1μm，具有運動性。LB培養(yǎng)基斜面30℃培養(yǎng)72h后，菌落呈乳白色，產(chǎn)生折皺。以16S

4、 rDNA序列為基礎(chǔ)構(gòu)建了包括14株相關(guān)種屬細(xì)菌在內(nèi)的系統(tǒng)發(fā)育樹，其中，與芽孢桿菌屬細(xì)菌有很高的同源性(92％-98.3％)，與蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)十分接近，序列相似性值98.3％。 通過對平板對峙篩選的最強(qiáng)拮抗菌S11，S13，SA2，SA16進(jìn)行室內(nèi)盆栽試驗，選取盆栽試驗效果最好的菌株SA2進(jìn)行田間試驗。試驗地選在成都市都江堰龍池鎮(zhèn)的山葵種植場黑根病發(fā)病率在50％以上的場地。盆栽試驗