鏈霉菌SM037抑制綠膿桿菌活性物質(zhì)合成條件及提取方法研究.pdf

1、從La含量為1400ppm的土壤中篩選對綠膿桿菌有抑制活性的放線菌株，其中菌株SM037的抑制活性較高，并且對金黃色葡萄球菌、蘇云金芽孢桿菌、雞白痢、大腸桿菌、白色念珠菌均有抑菌作用，是一株具有廣譜抗菌活性的菌株，因此實(shí)驗(yàn)對SM037進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。 根據(jù)SM037菌株在高氏1號(hào)上的菌絲形態(tài)、孢子形狀；在不同培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征及明膠液化、淀粉水解、纖維素上生長情況、H2S的產(chǎn)生、碳源利用等一系列生理生化特征，將SM037菌株

2、歸類為金色類群，初步鑒定為黃雀鏈霉菌黃雀變種。 為提高抑菌活性物質(zhì)的產(chǎn)量，對SM037的液體培養(yǎng)基成分進(jìn)行了優(yōu)化。通過杯碟法檢測發(fā)酵液中活性物質(zhì)的含量，篩選出最佳碳源為可溶性淀粉，最佳氮源為硝酸鉀；通過改變碳、氮比的實(shí)驗(yàn)及關(guān)于碳、氮源及磷酸鹽的正交實(shí)驗(yàn)，獲得碳源、氮源及磷酸鹽配比為：可溶性淀粉4％，KNO30.2％，K2HPO40.05％。 發(fā)酵工藝條件的研究結(jié)果表明最適初始pH為7.5～8.0，最適溫度為28℃，最適接

3、種量為7％，250ml的三角瓶裝入50ml為最佳裝液量，最適接種菌齡48h。在優(yōu)化后的培養(yǎng)基和最佳發(fā)酵條件下，96～108h抑菌活性物質(zhì)的分泌量達(dá)到最高峰。經(jīng)過培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的優(yōu)化，發(fā)酵液中抑菌活性物質(zhì)的效價(jià)由原來的326u·ml-1提高至1592u·ml-1。 發(fā)酵液的抑菌活性物質(zhì)在60℃水浴30min后仍然穩(wěn)定，在70℃時(shí)開始變性，80～121℃活性喪失較快。在堿性條件下，發(fā)酵液的抑菌活性能力隨著pH值逐漸上升而緩慢減少；

4、在酸性條件下，隨著pH逐漸下降，抑菌活性降低較快。實(shí)驗(yàn)說明，該，抑菌活性物質(zhì)在堿性條件下較穩(wěn)定，在酸性條件下不穩(wěn)定。 對發(fā)酵液進(jìn)行醇沉、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、GF254硅膠板薄層分析等方法進(jìn)行活性物質(zhì)的分離純化，用質(zhì)譜檢測活性物質(zhì)的分子量，發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)中主要含有三個(gè)信號(hào)較強(qiáng)的物質(zhì)，分別記為S-Ⅰ，S-Ⅱ，S-Ⅲ。對S-Ⅰ，S-Ⅱ，S-Ⅲ的二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行分析，結(jié)合天然活性物質(zhì)庫查詢，推測S-Ⅰ，S-Ⅱ，S-Ⅲ的可能分子式為C10