降鈣素基因相關(guān)肽在氣道上皮損傷修復(fù)中的作用研究.pdf

1、目的：研究降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)氣道上皮損傷后修復(fù)過(guò)程的影響，并探討其胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 方法：(1)CGRP對(duì)人氣道上皮損傷修復(fù)的影響：以人支氣管上皮細(xì)胞(hliman bronchial epithelial cells，HBECs)株為研究對(duì)象，觀察CGRP對(duì)HBECs損傷修復(fù)指數(shù)的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)HBECs增殖相關(guān)抗原Ki67的表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)CGRP對(duì)HBECs S期細(xì)胞百分率(SPF)和細(xì)胞增殖指數(shù)(P

2、I)的影響。(2)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究：以HBECs為研究對(duì)象，觀察PKC抑制劑H-7和MAPK抑制劑PD98059對(duì)CGRP促損傷修復(fù)作用的影響；采用凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response elementbinding protein(CREB)與DNA的結(jié)合活性，觀察CGRP對(duì)其結(jié)合能力的影響及PKC、MEK信號(hào)途徑在其中的作用。 結(jié)果： 1．CGRP對(duì)人氣道上皮損傷修

3、復(fù)的影響 (1)在體外培養(yǎng)的HBECs細(xì)胞層機(jī)械刮擦造成缺損。24h后，對(duì)照組缺損處已全部長(zhǎng)滿，損傷修復(fù)指數(shù)(RI)為4.3。隨著CGRP濃度的增加，10<'-10>mol／L～10<'-7>mol／L CGRP可使HBECs的損傷修復(fù)速度明顯增快，RI分別為5.8、6.1、6.7、7.6。與對(duì)照組相比，差異具有顯著性(P<0.05)。提示CGRP可明顯促進(jìn)HBECs損傷后的修復(fù)，且呈濃度依賴性。 (2)與對(duì)照組Ki

4、67陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)(LI)值相比，CGRP處理24h后，HBECs的Ki67表達(dá)明顯增加，p<0.01；呈濃度依賴性，提示CGRP可明顯促進(jìn)HBECs Ki67的表達(dá)。 (3)與對(duì)照組相比，加入CGRP(10<'-8>mol／L)24h后IIBECs的細(xì)胞周期發(fā)生明顯變化，S期細(xì)胞百分比由(31.3±3.5)％上升到(49.4±5.7)％，G2／M期細(xì)胞百分比由(16.5±1.6)％上升到(24.6±1.9)％， (p<0

5、.05)。結(jié)果表明，CGRP可明顯增強(qiáng)HBECs的增殖。 2．CGRP促HBECs損傷修復(fù)的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究 (1)與對(duì)照組相比，在CGRP處理組中分別加入H-7和PD98059后，CGRP對(duì)HBECs損傷修復(fù)速度的促進(jìn)效應(yīng)被逆轉(zhuǎn)(P<0.01)?？梢奀GRP發(fā)揮促HBECs損傷修復(fù)作用與PKC和MAPK途徑有關(guān)。 (2)與對(duì)照組相比，CGRP處理組HBECs LI值明顯增大，加入H-7及PD98059預(yù)

6、處理可阻斷CGRP促Ki67表達(dá)的效應(yīng)(P<0.01)。 (3)與CGRP處理組相比，加入H-7及PD98059預(yù)處理HBECs，CGRP的促SPF及PI效應(yīng)被逆轉(zhuǎn)(p<0.01)，提示CGRP對(duì)HBECs促增殖效應(yīng)的發(fā)揮與PKC及MAPK途徑有關(guān)。 (4)與對(duì)照組相比，CGRP可顯著提高HBECs CREB與DNA的結(jié)合活性(P<0.01)，其效應(yīng)可被H-7阻斷，差異有顯著性(P<0.01)。與CGRP處理組相比，

7、CGRP+PD98059組HBECs CREB與DNA的結(jié)合活性無(wú)明顯變化?？梢?，CGRP可顯著提高HBECs CREB與DNA的結(jié)合活性，其效應(yīng)的發(fā)揮與PKC途徑有關(guān)，而與MEK途徑關(guān)系不明顯。 結(jié)論： 1．CGRP可加快HBECs的損傷修復(fù)過(guò)程。 2．CGRP可促進(jìn)HBECs的增殖。 3．CGRP促HBECs損傷修復(fù)及增殖效應(yīng)的發(fā)揮與PKC及MAPK胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)。 4．CGR