降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）在運(yùn)動(dòng)病發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究.pdf

1、運(yùn)動(dòng)病(motionsickness，MS)，又稱暈動(dòng)病，是受不適宜的運(yùn)動(dòng)環(huán)境或運(yùn)動(dòng)環(huán)境中不習(xí)慣因素的刺激所導(dǎo)致的一種機(jī)體特殊反應(yīng)癥候群。MS由于發(fā)病所處的各種運(yùn)動(dòng)環(huán)境不同，因此有不同的稱謂，如空暈病(暈機(jī)病，Airsickne，AS)、暈海病、暈車病、暈動(dòng)圖片病、模擬器病和航天運(yùn)動(dòng)病(spacemotionsickness，SMS)等。AS、SMS因其高發(fā)生率一直以來(lái)就是困擾航空航天的重要醫(yī)學(xué)問(wèn)題。由于MS本身的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，而A

2、S、SMS又是人體對(duì)空間特殊環(huán)境的一種適應(yīng)性反應(yīng)，故AS、SMS的研究難以深入，目前對(duì)AS、SMS仍然缺乏有效的防治措施。隨著載人航天事業(yè)的發(fā)展，以及未來(lái)戰(zhàn)爭(zhēng)中航空兵作用的日漸重要，AS、SMS防治問(wèn)題就成為當(dāng)務(wù)之急。近年研究發(fā)現(xiàn)，降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningene-relatedpeptide，CGRP)也是傳出性前庭神經(jīng)系統(tǒng)的一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，其不但能夠直接興奮前庭毛細(xì)胞，同時(shí)與已知的MS發(fā)病相關(guān)的中樞神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿

3、(Ach)、組胺，以及Ca2+等之間均有著密切的關(guān)系。更重要的是，CGRP作為迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)有力的腦血管舒張肽，能夠改變腦部，包括外周前庭感受器的血流量，通過(guò)血流量的調(diào)節(jié)在前庭功能中發(fā)揮著廣泛的作用。體液轉(zhuǎn)移(fluidshift)時(shí)會(huì)引起CGRP含量發(fā)生改變，而前者是SMS的誘發(fā)因素之一，因此CGRP遞質(zhì)可能在MS發(fā)病中起重要作用，但是未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為了探討CGRP在MS發(fā)病機(jī)制中的作用，本課題主要在以下方面進(jìn)行了研究：1、建

4、立MS大鼠動(dòng)物模型的裝置和方法；2、MS大鼠血漿CGRP含量的變化；3、CGRP在MS大鼠前庭傳出中樞神經(jīng)系統(tǒng)(efferentvestibularcentralnervoussystem，EVCNS)和前庭核(vestibularnuclei,Ve)的表達(dá)變化；4、模擬失重1wk對(duì)CGRP在大鼠EVCNS和Ve表達(dá)的影響；5、山莨菪堿對(duì)CGRP在MS大鼠EVCNS和Ve表達(dá)的影響。 材料和方法使用旋轉(zhuǎn)刺激裝置，運(yùn)用梯形運(yùn)行模式

5、旋轉(zhuǎn)刺激，建立MS大鼠動(dòng)物模型。利用動(dòng)物MS條件性厭食來(lái)建立可行、可靠的MS動(dòng)物模型以及動(dòng)物MS易感性評(píng)價(jià)方法。利用放射免疫方法觀察MS大鼠血漿CGRP含量的變化。運(yùn)用尾部懸吊動(dòng)物的方法模擬動(dòng)物的失重狀態(tài)。使用多聚甲醛心臟灌注固定、腦干冰凍切片、免疫組織化學(xué)染色的方法觀察CGRP在大鼠EVCNS和Ve的表達(dá)；觀察其在大鼠運(yùn)動(dòng)病狀態(tài)下、大鼠模擬失重狀態(tài)的表達(dá)變化；并觀察山莨菪堿灌胃后對(duì)CGRP在MS大鼠EVCNS和Ve表達(dá)的影響。

6、 結(jié)果1.MS大鼠動(dòng)物模型的建立運(yùn)用旋轉(zhuǎn)刺激裝置通過(guò)梯形運(yùn)行模式，旋轉(zhuǎn)刺激30min后，大鼠24h糖精水飲用量與刺激前相比明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠對(duì)糖精水發(fā)生了條件性厭食癥(conditionedtasteaversion，CTA)，MS模型成功建立。 2.MS大鼠血漿CGRP含量的變化實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)刺激30min后20min、6h、1d、3d大鼠血漿CGRP含量與對(duì)照組相比差異沒(méi)有顯著性意義；MS敏感組與MS不敏感

7、組相比，刺激前后24h糖精水飲用減少量百分比有非常顯著性差異，而旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)刺激后血漿CGRP含量差異則無(wú)顯著性意義。 3.CGRP在MS大鼠EVCNS和Ve的表達(dá)變化與對(duì)照組相比，MS大鼠前庭傳出神經(jīng)系統(tǒng)CGRP陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目明顯增多，前庭核CGRP陽(yáng)性結(jié)構(gòu)表達(dá)明顯增強(qiáng)，且均與刺激強(qiáng)度呈正比。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物前庭傳出神經(jīng)系統(tǒng)CGRP陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目以及前庭核CGRP陽(yáng)性結(jié)構(gòu)光密度值與對(duì)照組比較，差異均有顯著性意義。 4.模擬失重1

8、wk對(duì)CGRP在大鼠EVCNS和Ve表達(dá)變化的影響尾部懸吊模擬失重1wk后，前庭傳出神經(jīng)系統(tǒng)CGRP陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目明顯增多，VeCGRP陽(yáng)性結(jié)構(gòu)光密度值明顯升高。 5.山莨菪堿對(duì)CGRP在MS大鼠EVCNS和Ve表達(dá)的影響。旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)刺激前30min山莨菪堿灌胃，可顯著降低CGRP在MS大鼠EVCNS和Ve表達(dá)。 結(jié)論1、CGRP與MS的關(guān)系運(yùn)用旋轉(zhuǎn)刺激裝置，梯形運(yùn)行模式旋轉(zhuǎn)刺激30min，可使大鼠發(fā)生明顯的CTA，誘發(fā)大

9、鼠MS，因此本實(shí)驗(yàn)中所采用的大鼠MS動(dòng)物模型的造模方法是可行的。CGRP在MS大鼠EVCNS表達(dá)顯著增強(qiáng)，且與刺激強(qiáng)度呈正比，提示MS大鼠前庭傳出中樞神經(jīng)系統(tǒng)CGRP對(duì)前庭傳入信息功能的調(diào)節(jié)作用增強(qiáng)，而運(yùn)動(dòng)刺激前30min灌胃給予抗MS藥山莨菪堿，可以緩解MS癥狀，且可以降低CGRP在MS大鼠EVCNS表達(dá)，這些均提示前庭傳出性神經(jīng)系統(tǒng)CGRP參與了MS的發(fā)病過(guò)程。在實(shí)驗(yàn)中觀察到，Ve有大量CGRP陽(yáng)性結(jié)構(gòu)存在，且隨著運(yùn)動(dòng)刺激強(qiáng)度的增加