經(jīng)典Wnt通路在糖皮質(zhì)激素抑制氣道上皮損傷后修復(fù)中的作用.pdf

1、第一部分：建立OVA誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型
　　目的:建立OVA誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型。
　　方法:將脫敏飲食喂養(yǎng)3W的BABL/C小鼠隨機(jī)分為對照組（PBS組）和哮喘組（OVA組）,每組12只。哮喘組在第1,14天腹腔注射200μlOVA(卵清蛋白)致敏液致敏，第21-30天1％ OVA溶液超聲霧化激發(fā)。對照組在相同時間，采用同種方法給予同劑量的PBS。通過觀察和肺功能檢測兩組小鼠在不同濃度（0，3.125，6.25，12.5，2

2、5，50mg/ml）乙酰甲膽堿（MCH）激發(fā)中的表現(xiàn)和氣道反應(yīng)性，HE染色分析肺組織病理改變，肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞計數(shù)和分類計數(shù)等評價哮喘模型是否建立成功。
　　結(jié)果:與對照組比較，哮喘組在乙酰甲膽堿（MCH）激發(fā)中出現(xiàn)口唇黏膜發(fā)紫，扭體，躁動等癥狀，肺功能顯示有明顯的氣道高反應(yīng)，并隨著MCH濃度的升高，反應(yīng)不斷加重，HE染色顯示肺組織明顯的病理炎癥改變，BALF細(xì)胞數(shù)量增多和嗜酸粒細(xì)胞分類計數(shù)升高，兩組具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

3、
　　結(jié)論:成功建立OVA誘導(dǎo)的BABL/C小鼠哮喘模型
　　第二部分：糖皮質(zhì)激素通過調(diào)控Wnt通路抑制氣道上皮損傷后修復(fù)
　　目的:探討糖皮質(zhì)激素抑制哮喘小鼠氣道上皮損傷后修復(fù)的Wnt通路研究。
　　方法:體內(nèi)實驗將BABL/C小鼠分為4組；PBS組，PBS+DEX組，OVA組，OVA+DEX組。在 OVA霧化的28-30天，PBS+DEX組和OVA+DEX組分別經(jīng)腹腔注射給予5mg/kg地塞米松（DEX），P

4、BS組和OVA組則給予相同劑量的PBS。免疫組化檢測顯示各組小鼠氣道上皮損傷情況，Q-PCR檢測肺勻漿中Wnt通路相關(guān)分子；Wnt7b、LRP6、CyclinD1以及鈣粘素E-cadherin1的表達(dá)量。體外實驗檢測人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）經(jīng)糖皮質(zhì)激素處理后PCR檢測上皮細(xì)胞中Wnt7b、LRP6、CyclinD1的表達(dá)量，進(jìn)而檢測了16HBE的細(xì)胞周期。
　　結(jié)果:體內(nèi)糖皮質(zhì)激素治療后，OVA+DEX組小鼠氣道上皮E-ca

5、dherin1表達(dá)量下降，上皮組織損傷明顯，修復(fù)延遲，PCR檢測肺組織中Wnt7b、LRP6、CyclinD1表達(dá)量升高，與OVA組+PBS組比較有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。體外實驗中，16HBE經(jīng)糖皮質(zhì)激素處理后，處理組16HBE細(xì)胞周期G0/G1增加，G2/M減少，PCR檢測Wnt7b、LRP6、CyclinD1表達(dá)量升高，與PBS處理組比較有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:體內(nèi)外實驗證實Wnt通路在糖皮質(zhì)激素抑制哮喘小鼠氣道上皮損傷后修復(fù)