糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激家禽食欲調(diào)控中的作用機(jī)制.pdf

1、本試驗(yàn)采用禁食、熱應(yīng)激、腦室注射和外周注射糖皮質(zhì)激素(GCs)的方法，研究了GCs對(duì)家禽食欲的調(diào)控機(jī)制。通過禁食試驗(yàn)中，初步探討了中樞單磷酸腺苷激酶(AMPK)信號(hào)的食欲調(diào)節(jié)作用;通過腦室注射GCs，研究了AMPK信號(hào)在中樞GCs對(duì)家禽采食量調(diào)控的作用機(jī)制;通過外周注射GCs，研究了GCs影響肉仔雞選擇不同能量日糧的影響及調(diào)控機(jī)制;通過熱應(yīng)激處理研究了其降低食欲有關(guān)的食欲調(diào)節(jié)肽，最終明確了GCs在應(yīng)激家禽食欲調(diào)控中的作用機(jī)制。
　

2、　AMPK在以應(yīng)激家禽食欲調(diào)控中的作用。通過禁食初步探討了AMPK在對(duì)家禽食欲調(diào)控的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):禁食24小時(shí)處理顯著升高了肉仔雞下丘腦中AMPKα2、AMPKβ1、AMPKβ2和AMPKγ1的mRNA水平;禁食48小時(shí)顯著增加肉仔雞下丘腦中肝激酶(LKB1)和AMPK的蛋白磷酸化水平和刺鼠色蛋白相關(guān)蛋白（AgRP）、促黑激素受體4(MC4R)、神經(jīng)肽Y(NPY)、黑皮質(zhì)素(MCH)、食欲素(Pre-orexin)基因表達(dá)?；謴?fù)采食后

3、禁食所造成的影響消除。這一結(jié)果表明AMPK信號(hào)參與家禽的能量代謝，可能是通過AgRP/NPY作用的。因此，我們推測(cè)AMPK信號(hào)也可能在GCs調(diào)節(jié)家禽食欲中發(fā)揮一定的作用，通過腦室注射地塞米松(DEX)后顯著增加了肉仔雞采食量以及下丘腦中NPY、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)、糖皮質(zhì)激素受體(GR)的基因表達(dá)和AMPK、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)的蛋白磷酸化水平。結(jié)果表明GCs可能與受體結(jié)合后通過調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)級(jí)聯(lián)，使得NPY表達(dá)增加，

4、導(dǎo)致肉仔雞采食量升高。為進(jìn)一步驗(yàn)證我們的推測(cè)，我們又腦室注射AMPK抑制劑Compound C和GR抑制劑RU486，結(jié)果顯示:預(yù)先抑制AMPK顯著緩解了DEX導(dǎo)致的肉仔雞采食量增加的現(xiàn)象;同時(shí)，DEX對(duì)NPY和CPT1基因表達(dá)與AMPK和ACC的蛋白磷酸化水平上的影響都恢復(fù)到正常水平。預(yù)先中樞抑制GR后顯著抑制DEX誘導(dǎo)的高采食量現(xiàn)象，也緩解DEX對(duì)NPY和CPT1基因表達(dá)與AMPK和ACC的蛋白磷酸化水平上的影響。這些結(jié)果說明AMP

5、K信號(hào)通路在GCs促進(jìn)家禽食欲中發(fā)揮一定的作用;此外，GCs對(duì)家禽食欲的影響還具有一定的受體依賴性。
　　外周GCs對(duì)家禽能量食欲的影響。試驗(yàn)首先研究了外周GCs對(duì)家禽中樞食欲因子的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn):連續(xù)外周注射7天皮質(zhì)酮顯著降低蛋雞的采食量和中樞中POMC和AgRP的表達(dá)量，卻顯著增加了中樞中Ghrelin和CART的表達(dá)量。這說明升高外周GCs同樣也能影響到家禽中樞食欲因子，為了進(jìn)一步確定外周GCs對(duì)家禽能量食欲的影響，我們研究

6、了在皮質(zhì)酮作用下肉仔雞對(duì)不同能量日糧選擇性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)酮增加了其對(duì)高能日糧的采食。為了確定GCs導(dǎo)致肉仔雞對(duì)高能日糧偏愛的原因，我們又設(shè)立了皮質(zhì)酮作用下對(duì)肉仔雞分別飼喂高能日糧和低能日糧，結(jié)果顯示:在低能日糧飼喂的肉仔雞中，皮質(zhì)酮顯著增加了下丘腦中促腎上腺激素釋放激素(CRH)基因表達(dá);在高能日糧飼喂的肉仔雞中，皮質(zhì)酮顯著增加了下丘腦中CPT1基因表達(dá)和AMPK、ACC蛋白磷酸化;無論對(duì)肉仔雞飼喂何種日糧，皮質(zhì)酮都顯著增加了下丘

7、腦中NPY基因的表達(dá)。這些結(jié)果表明GCs誘導(dǎo)肉仔雞對(duì)高能日糧的偏愛過程可能與AMPK信號(hào)和NPY/CRH信號(hào)有關(guān)。為了進(jìn)一步確定我們的推測(cè)，我們又在皮質(zhì)酮作用下腦室注射了AMPK的激活劑(AICAR)和抑制劑(Compound C)，結(jié)果顯示:腦室注射AICAR后加重了皮質(zhì)酮對(duì)肉仔雞采食高能日糧誘導(dǎo)效應(yīng)和對(duì)下丘腦中NPY基因和AMPK與ACC蛋白磷酸化的促進(jìn)作用，卻能顯著緩解皮質(zhì)酮對(duì)中樞CRH的抑制作用;而腦室注射不同劑量的Compou

8、nd C并沒有顯著抑制皮質(zhì)酮對(duì)AMPK的促進(jìn)效應(yīng)。這些結(jié)果表明GCs促進(jìn)家禽采食高能日糧過程與中樞AMPK信號(hào)有關(guān)。此外，GCs作用下伏隔核(NAc)中獎(jiǎng)賞系統(tǒng)、海馬中記憶系統(tǒng)和胃腸道中腦腸肽的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn):在飼喂高能日糧的肉仔雞中，皮質(zhì)酮顯著降低了腺胃、十二指腸中Ghrelin的基因表達(dá);高能日糧顯著緩解了皮質(zhì)酮對(duì)肉仔雞NAc內(nèi)多巴胺的抑制;在正常和低能日糧飼喂的肉仔雞中，皮質(zhì)酮對(duì)顯著抑制海馬中GR的抑制效應(yīng)越顯著。這些結(jié)果表明GC

9、s導(dǎo)致家禽對(duì)高能日糧偏愛過程還可能與NAc中獎(jiǎng)賞系統(tǒng)、海馬中記憶系統(tǒng)和胃腸道中腦腸肽有關(guān)。
　　熱應(yīng)激對(duì)家禽食欲的影響。研究了急性熱應(yīng)激組(35±1.5℃6個(gè)小時(shí))和長期熱應(yīng)激（環(huán)境溫度為31±1.5℃7天）對(duì)家禽食欲的影響。結(jié)果表明:熱應(yīng)激7天顯著降低蛋雞的采食量和下丘腦中CCK的表達(dá)，卻顯著升高了中樞中Ghrelin和CART的mRNA水平;急性熱應(yīng)激顯著抑制了肉雞在6小時(shí)內(nèi)的采食量，而對(duì)中樞中各食欲因子的表達(dá)影響不顯著。這說

10、明熱應(yīng)激都降低了家禽食欲，但熱應(yīng)激的劇烈程度和時(shí)間可能影響到中樞食欲因子的表達(dá)。
　　綜上所述，中樞AMPK信號(hào)可能參與家禽的能量調(diào)控，在一定程度上是通過下丘腦中NPY/AgRP神經(jīng)元，并且AMPK信號(hào)還參與了中樞GCs對(duì)家禽食欲的影響，主要是通過AMPK-NPY神經(jīng)元作用的。外周GCs能夠通過激活下丘腦內(nèi)AMPK-NPY-CRH信號(hào)途徑促進(jìn)肉仔雞采食高能日糧。此外，外周GCs導(dǎo)致肉仔雞對(duì)采食高能日糧偏愛還可能與NAc中獎(jiǎng)賞系統(tǒng)、