塔瑪亞歷山大藻“游動孢子”釋放機(jī)制的初步研究.pdf

1、赤潮作為一種世界性的危害，其爆發(fā)時對于海洋環(huán)境、水產(chǎn)養(yǎng)殖乃至人類健康都會造成巨大損害，因此赤潮的起源和防治多年來一直是眾多專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)。上個世紀(jì)九十年代提出的微全分析系統(tǒng)，具有微型化、集成化和便攜化等優(yōu)勢。因此可以利用微流控芯片來模擬赤潮藻的自然生長環(huán)境，對群體及單個細(xì)胞進(jìn)行精確的捕捉和控制，這也將為研究赤潮爆發(fā)的機(jī)制以及控制赤潮爆發(fā)提供一個新的技術(shù)形式。
　　 本研究結(jié)合微流控芯片技術(shù)對塔瑪亞歷山大藻釋放類似游動孢子的生

2、物體（以下簡稱“游動孢子”）現(xiàn)象進(jìn)行了初步的研究。在微流控芯片上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，研究了塔瑪亞歷山大藻的生活史以及游動生物體的產(chǎn)生、釋放、相互作用和生長等動態(tài)過程;對塔瑪亞歷山大藻細(xì)胞釋放出的游動生物體進(jìn)行形態(tài)和分子生物學(xué)鑒定;構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹了解游動生物體的進(jìn)化過程對其進(jìn)行初步分類;對此游動生物體存在的生態(tài)學(xué)意義進(jìn)行研究。
　　 正如Denn等[1]、Garcés等[2]和Leander等[3]在其文章中所講，文中所提到的“游動孢子

3、”并非實(shí)際意義上塔瑪亞歷山大藻生活史中的游動孢子，而是對上述塔瑪亞歷山大藻所釋放出來的微小近球形的游動生物體的更加形象的說法。本文結(jié)果如下:
　　 (1)制作微流控芯片用于塔瑪亞歷山大藻的培養(yǎng)和“游動孢子”的富集。在微流控芯片上對塔瑪亞歷山大藻細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)記錄，觀察到塔瑪亞歷山大藻細(xì)胞的厚壁孢囊釋放“游動孢子”的現(xiàn)象，每個厚壁孢囊對于“游動孢子”的釋放量不等，最高可達(dá)50個;同時在微流控芯片上記錄了“游動孢子”的二分裂過程。

4、r>　　 (2)塔瑪亞歷山大藻起始密度越低，厚壁孢囊的生長越緩慢，最大生長量出現(xiàn)時間也越晚，不同稀釋濃度下厚壁孢囊的最大生長點(diǎn)總是出現(xiàn)在塔瑪亞歷山大藻最大生長點(diǎn)之后的2-4天。
　　 (3)不同培養(yǎng)基濃度下塔瑪亞歷山大藻和“游動孢子”的記數(shù)發(fā)現(xiàn)，塔瑪亞歷山大藻的最適生長培養(yǎng)基濃度為100％的f/2培養(yǎng)基，而“游動孢子”的最適生長培養(yǎng)基濃度則為10％的培養(yǎng)基濃度。強(qiáng)光刺激以及滲透壓改變都會促使厚壁孢囊裂解，從而釋放“游動孢子”。

5、
　　 (4)使用改進(jìn)后的低速離心收集未脫水的方法處理“游動孢子”樣品，拍攝掃描電鏡，對“游動孢子”的形態(tài)有個清晰的了解:細(xì)胞近似圓形，大小為2-4μm;頂部具有兩根不等長的鞭毛，長鞭毛是體長的3-4倍，具有茸毛，而短鞭毛是體長的2/3倍，沒有茸毛;在鞭毛著生部位正對面有個底孔;底孔附近有個以凹陷起始的縱溝，一直延伸到鞭毛著生處。
　　 (5)提取“游動孢子”的基因組，進(jìn)行18s rDNA序列擴(kuò)增，測序，構(gòu)建游動孢子的S