USP26基因突變與男性無(wú)精子癥的相關(guān)性.pdf

1、近年來(lái)，不孕不育已經(jīng)成為一個(gè)世界性問(wèn)題，在眾多導(dǎo)致不孕不育的原因中，男性不育癥所占比重已經(jīng)高達(dá)50％。在男性不育癥中，無(wú)精子癥的發(fā)病率日益增高，其發(fā)病率已高達(dá)15%-20%。其原因復(fù)雜、因素之多給臨床診治帶來(lái)了很多困難。隨著臨床先進(jìn)技術(shù)的應(yīng)用，部分導(dǎo)致男性不育癥的病因已被確定，如遺傳性疾?。撼Ｈ旧w或性染色體異常；睪丸本身病變：如睪丸外傷、炎癥、扭轉(zhuǎn)以及睪丸血管病變；內(nèi)分泌疾病、垂體功能亢進(jìn)、垂體腫瘤、腎上腺功能亢進(jìn)或低下、甲亢或甲低，

2、均可影響精子生成而造成無(wú)精子癥。但目前仍有部分病例無(wú)法探知其確切的病理機(jī)制。造成男性不育的原因主要有：染色體畸形病變、Y染色體生精基因的缺失與突變及X染色體上生精基因的突變。泛素特異蛋白酶26基因是位于X染色體上，該基因與雄性不育具有相關(guān)性。泛素蛋白酶歸屬于去泛素化酶(DUB)家族，這種酶可對(duì)泛素與蛋白質(zhì)的結(jié)合產(chǎn)生拮抗作用，并對(duì)蛋白質(zhì)的異常降解有降低的作用，而該基因的突變把該酶的這種作用在某種程度上進(jìn)行了抑制，泛素特異蛋白酶26(USP

3、26)基因編碼由913個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，該基因位于Xq26.2，由2794個(gè)堿基組成，僅有單一外顯子，隸屬與男性不育癥相關(guān)的眾多候選基因之一，屬于去泛素化酶家族，其特異表達(dá)于睪丸，插入突變和點(diǎn)突變?yōu)槠涑Ｒ?jiàn)的突變類(lèi)型，對(duì)于與該基因生理功能相關(guān)的研究目前仍很少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究USP26基因多態(tài)性在無(wú)精子癥患者與其在正常男性中的表達(dá)差異，通過(guò)seqman軟件分析比對(duì)基因測(cè)序結(jié)果，確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長(zhǎng)度為947b

4、p的基因片段中突變的方式和位點(diǎn)，可能對(duì)了解及揭示無(wú)精子癥發(fā)生的某些機(jī)制，對(duì)部分男性無(wú)精子癥的診斷及針對(duì)性治療有某些重要的意義。
　　目的
　　通過(guò)seqman軟件分析比對(duì)基因測(cè)序結(jié)果，確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長(zhǎng)度為947bp的基因片段中突變的方式和位點(diǎn)，確定無(wú)精子癥患者泛素特異蛋白酶26( USP26）基因多態(tài)性與男方無(wú)精子癥的關(guān)系。
　　材料和方法
　　1.實(shí)驗(yàn)材料：根據(jù)WHO精液檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

5、，精液離心后取沉渣鏡檢，3次均未發(fā)現(xiàn)精子可確診為無(wú)精子癥，無(wú)精子癥可以分為梗阻性與非梗阻性兩大類(lèi)型，排除因輸精管道缺如(如輸精管、精囊缺如)或輸精管道阻塞(輸精管結(jié)扎、射精管梗阻)等所致梗阻性無(wú)精子癥及染色體畸形病變、Y染色體微缺失等。選取2013年1月-2013年9月來(lái)鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖中心就診的50例非梗阻性無(wú)精子癥患者作為病例組，同時(shí)取50例男方生育力正常者作為對(duì)照組，排除因男性不育實(shí)施過(guò)手術(shù)治療或通過(guò)輔助生殖技術(shù)獲得生育者

6、。清晨空腹采集病例組及對(duì)照組上肢靜脈血3ml，將所采集標(biāo)本移置EP管并保存于-20℃待測(cè)。
　　2.研究方法：嚴(yán)格按照試劑盒使用方法提取病例組及對(duì)照組外周血DNA，PCR方法擴(kuò)增患者外周血基因組獲得泛素特異蛋白酶26基因片段，通過(guò)seqman軟件分析比對(duì)基因測(cè)序結(jié)果，確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長(zhǎng)度為947bp的基因片段中突變的方式和位點(diǎn)。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：運(yùn)用seqman軟件分析測(cè)序結(jié)果，采用SPSS

7、17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。病例組與對(duì)照組之間的差異使用X2檢驗(yàn)，雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　1.基因測(cè)序分析結(jié)果顯示：在所測(cè)的259-1206基因片段中，50例對(duì)照組均未檢測(cè)到USP26基因的突變，但在50例病例組中有12例存在USP26基因突變，其中主要表現(xiàn)為363-364位點(diǎn)插入了ACA及494位點(diǎn)T置換成C，其余位點(diǎn)未見(jiàn)突變。
　　2.在所測(cè)結(jié)果中，50例無(wú)精子癥

8、患者中有12例患者在363-364位點(diǎn)插入ACA及494位點(diǎn)T置換成C，突變的同時(shí)伴隨有氨基酸序列的改變，其突變率為24%，X2=13.636，P=0.000（<0.005），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.正常生育組未見(jiàn)突變。P=1（>0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論
　　1.男性無(wú)精子癥的發(fā)生與USP26基因突變存在某種聯(lián)系，這種基因突變可能會(huì)在某種程度上造成精液質(zhì)量的嚴(yán)重下降或在一定程度上調(diào)控精子的發(fā)生，進(jìn)而導(dǎo)致男