結(jié)核分枝桿菌基因突變與耐異煙肼的相關(guān)性及其檢測.pdf

1、目的：分析結(jié)核分枝桿菌katG、inhA基因突變與耐異煙肼的相關(guān)性，并通過核酸薄膜導(dǎo)流雜交技術(shù)快速檢測基因突變，初步判斷有無結(jié)核分枝桿菌感染并提示其耐藥性。
　　 方法：對貴州省遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸二科結(jié)核病區(qū)2007年6月至2008年11月期間住院病人進行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、菌型鑒定及藥物敏感性試驗，在培養(yǎng)菌落中提取細菌DNA，進行PCR擴增，將所有擴增產(chǎn)物進行DNA序列分析，并將DNA測序結(jié)果與藥物敏感性試驗結(jié)果對比；將測序

2、中檢測到的與耐異煙肼相關(guān)的katG基因315位點的突變形式設(shè)計成寡核苷酸探針，并制成載有探針的薄膜，對上述87例標本中存在。katG基因315位點突變的18例菌株和15例katG基因野生型菌株共33例進行雜交測試。
　　 結(jié)果：87例菌株經(jīng)鑒定均為結(jié)核分枝桿菌，30（34.5％）例為耐異煙肼菌株，57（65.5％）例為異煙肼敏感菌株；87株結(jié)核分枝桿菌菌株中共21株（24.1％）出現(xiàn)katG基因突變，其中18株出現(xiàn)在315位點；

3、24例（27.6％）出現(xiàn)inhA基因突變：8例（9.2％）顯示雙基因聯(lián)合突變。30例耐異煙肼株中，18（60％）株出現(xiàn)katG和（或）inhA基因突變，12株未出現(xiàn)此兩基因突變；18株中有9（50％）株為katG單基因突變，5（27.8％）株為inhA單基因突變，4（22.2％）株為katG和inhA雙基因聯(lián)合突變。katG基因兩個新突變位點（Va1230Met和Pro232Gln）為國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)，已被美國，歐洲和日本的基因庫收錄。雜