人類圓頭精子癥相關基因突變檢測.pdf

1、人類圓頭精子癥是一種表現(xiàn)為頂體缺失的男性不育癥。家族性遺傳病例的報道提示其病因與遺傳因素有關。但是該疾病的確切發(fā)病原因和發(fā)病機制尚不完全清楚，應用精子胞漿內(nèi)注射法治療該病雖有一定進展，卻存在將未知的遺傳疾患傳給后代的風險。了解圓頭精子癥患者可能存在的基因突變，將有助于臨床治療和遺傳咨詢。首先，我們從本研究所羅克莉等對圓頭精子癥患者的蛋白質(zhì)組學研究結(jié)果出發(fā)，對臨床收集的三例圓頭精子癥患者的GOSR1基因和VAMP2基因進行突變檢測，但未找

2、到與疾病相關的突變。然后，我們根據(jù)基因剔除小鼠模型的結(jié)果，對上述三例患者進行Hrb、GOPC和Csnk2a2致病候選基因的突變檢測分析，除發(fā)現(xiàn)3個多態(tài)外，也未發(fā)現(xiàn)與疾病相關的突變。 第一章 GOSR1、VAMP2基因突變檢測分析 本研究所羅克莉等應用蛋白質(zhì)組學研究方法在一例圓頭精子癥患者精子蛋白質(zhì)中檢測到GOSR1蛋白和VAMP2蛋白的缺失，這兩種蛋白與高爾基體功能相關，而頂體又被公認衍生于高爾基體，這提示我們可能由于

3、GOSR1和VAMP2基因的改變造成相關蛋白的缺失。蛋白質(zhì)的缺失又有可能通過影響高爾基體的功能而導致生精過程障礙，最后導致圓頭精子癥的形成。因此，我們首先設計覆蓋這兩個基因的所有編碼區(qū)的引物共12對，采用PCR擴增各對引物，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)變性高效液相色譜分析儀分析。分析結(jié)果所有外顯子都呈單一正常峰型，由此，我們初步推定GOSR1、VAMP2基因不是本研究中三例患者的致病基因。 第二章 Hrb、GOPC和Csnk2a2基因突變檢

4、測分析 在初步排除GOSR1基因和VAMP2基因作為本研究中三例患者的致病候選基因后，根據(jù)基因剔除小鼠模型的結(jié)果，我們對Hrb、GOPC和Csnk2a2三個基因進行突變檢測分析，結(jié)果除發(fā)現(xiàn)3個多態(tài)：Hrb基因外顯子11 38A→G(rs17852770)和IVS XI nt.181 T→G，Csnk2a2基因外顯子10 IVSIX nt．-58 G→A(rs2242444)外，未發(fā)現(xiàn)與疾病相關的突變。由此，我們初步判定Hrb、