茼麻子中巰基化合物的測(cè)定及對(duì)重金屬脅迫的應(yīng)答作用研究.pdf

1、生物細(xì)胞內(nèi)的含半胱氨酸殘基的肽類(lèi)(像還原型谷胱甘肽,GSH)和蛋白質(zhì)(Prot-SH)等巰基化合物,具有抗氧化、促氨基酸吸收、重金屬解毒、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能，是在多種植物生理活動(dòng)中扮演重要作用的活性物質(zhì)。開(kāi)發(fā)一種靈敏、簡(jiǎn)便的分析方法，通過(guò)測(cè)定篩選富含巰基化合物的植物，探討與其生物學(xué)功能的相關(guān)性是目前研究的熱點(diǎn)之一。本研究利用能與半胱氨酸殘基的巰基進(jìn)行選擇性衍生化作用的衍生化試劑5,5?-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB),采用細(xì)胞破壁、

2、衍生化為一體的前處理方法，通過(guò)HPLC法和光譜法測(cè)定了茼麻子中GSH和含巰基蛋白質(zhì)(Prot-SH)中巰基的含量，發(fā)現(xiàn)茼麻子中有較高的GSH和Prot-SH含量分布。利用該分析方法測(cè)Cd2+、Cr3+、Pb2+、As3+、Fe3+、Cu2+等重金屬脅迫時(shí)茼麻子中GSH和Prot-SH的巰基含量變化，并結(jié)合ICP-MS測(cè)定，探討了不同重金屬脅迫時(shí)，茼麻子中GSH和Prot-SH的巰基應(yīng)答作用和重金屬吸附量的關(guān)系，同時(shí)探討了不同巰基化合物對(duì)

3、重金屬解毒和積累作用中所扮演的作用及機(jī)制，為進(jìn)一步研究利用草本植物生物修復(fù)重金屬污染的實(shí)際應(yīng)用提供重要的參考數(shù)據(jù)。
　　本研究分為四個(gè)部分：第一章緒論。概述了現(xiàn)階段草本植物茼麻子的研究狀況和細(xì)胞內(nèi)巰基化合物與重金屬作用的機(jī)理，并提出了茼麻子細(xì)胞中巰基化合物的檢測(cè)方法及其在重金屬積累與脅迫作用研究中面臨的問(wèn)題，并概述了本研究主要的選題思路和研究?jī)?nèi)容。第二章高效液相色譜法測(cè)定茼麻子中還原型谷胱甘肽(GSH)和總巰基(-SH)的含量。利

4、用柱前衍生化試劑5,5?-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB)，采用細(xì)胞破壁、衍生化同步進(jìn)行的提取方式，通過(guò)HPLC法選擇性測(cè)定了茼麻子中GSH和總巰基(-SH)的含量。對(duì)樣品前處理、色譜流動(dòng)相等色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，并建立了一種同步測(cè)定細(xì)胞內(nèi)含半胱氨酸殘基的巰基化合物的測(cè)定方法。測(cè)定結(jié)果表明；茼麻子中GSH和總巰基(-SH)三次測(cè)定均值分別為1.6053μmol/g和4.8759μmol/g，說(shuō)明茼麻子含豐富的GSH和巰基蛋白。在優(yōu)化的條

5、件下，測(cè)定方法的回收率達(dá)101.58％和98.47%，檢測(cè)限分別為5.18μmol/L和6.23μmol/L。第三章光譜法測(cè)定茼麻子中還原型谷胱甘肽和總巰基的含量。本研究采用細(xì)胞破壁與衍生化為一體的樣品前處理方法，利用鄰苯二甲醛（OPA）和5,5'-二硫雙-2-硝基苯甲酸（DTNB）為衍生化試劑，通過(guò)熒光光譜法和UV-vis吸收光譜法，測(cè)定了苘麻子中還原型谷胱甘肽(GSH)和總巰基(-SH)的含量。測(cè)定結(jié)果表明：苘麻子中富含 GSH和總

6、巰基，含量分別為1.4637?mol/g和4.9810?mol/g，熒光光譜法和 UV-Vis分光光度法的方法檢測(cè)限為0.04698μmol/L和1.5152μmol/L,回收率范圍為99.69%?100.27%和99.44%?100.89%。第四章茼麻子中巰基化合物對(duì)外源性重金屬的應(yīng)答作用。究采用富含巰基化合物的茼麻子作為實(shí)驗(yàn)樣本，利用衍生化試劑DTNB，通過(guò)高效液相色譜柱前衍生化法，研究不同重金屬脅迫細(xì)胞時(shí)巰基化合物的應(yīng)答作用。主要