甲基轉(zhuǎn)移酶SETD7與肝癌預(yù)后的相關(guān)性及其機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(HCC)是世界上最常見的腫瘤之一。在中國(guó)，HCC的發(fā)病率在各類惡性腫瘤中居第三位，而致死率則居第二位，數(shù)據(jù)顯示每千萬人中約有2626人死于肝細(xì)胞癌。肝細(xì)胞癌的發(fā)病原因十分復(fù)雜，其中包括基因組變異以及表觀遺傳修飾的改變，如組蛋白修飾的改變、異常的DNA甲基化、microRNA的表達(dá)發(fā)生改變等。H3K4的甲基化異常與肝癌的發(fā)病進(jìn)程相關(guān)，而它的甲基化水平受到甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTs)和去甲基化酶的調(diào)節(jié)。H3K4 HMTs的異常表達(dá)或者基

2、因突變會(huì)導(dǎo)致腫瘤的惡化。
　　賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶SETD7是包含SET結(jié)構(gòu)域蛋白的家族成員之一，不僅能夠甲基化H3K4促進(jìn)基因的表達(dá)，還能通過甲基化很多非組蛋白底物，調(diào)節(jié)蛋白的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄因子的活性以及調(diào)控啟動(dòng)子區(qū)的激活。在代謝相關(guān)疾病、病毒感染、腫瘤的形成以及一些炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)SETD7在腸再生以及腸道腫瘤的生成中發(fā)揮作用，它的高表達(dá)與卵巢癌的惡化相關(guān)，然而其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用還未見報(bào)道。本課題的主要

3、目的是為了探索SETD7與肝癌發(fā)生發(fā)展和預(yù)后的相關(guān)性以及對(duì)其在肝癌中發(fā)生中的作用及其相關(guān)的分子機(jī)制。
　　本課題首先收集了20例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的癌和癌旁組織標(biāo)本，通過WesternBlot以及QRT-PCR從蛋白水平以及mRNA水平檢測(cè)SETD7在組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)SETD7在大部分肝癌組織中的表達(dá)高于癌旁;然后，收集225例肝癌患者的臨床資料并通過隨訪了解他們術(shù)后的恢復(fù)情況，然后篩選出相應(yīng)的癌和癌旁組織的蠟塊制成組織芯片

4、，通過免疫組織化學(xué)(IHC)來檢測(cè)SETD7與H3K4me2在組織中的表達(dá)情況，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)分，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法結(jié)合臨床資料對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，相對(duì)于癌旁組織來說，SETD7在腫瘤組織中高表達(dá);SETD7在腫瘤組織中的表達(dá)情況與腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、分化、腫瘤的尺寸以及H3K4me2相關(guān);SETD7高表達(dá)預(yù)示患者的預(yù)后差。
　　為了了解SETD7影響肝癌進(jìn)程的機(jī)制，我們構(gòu)建了SETD7過表達(dá)質(zhì)粒，合成SETD7的小干擾RNA(

5、siRNA)，通過在細(xì)胞中干擾或過表達(dá)SETD7來研究其在肝癌細(xì)胞系中的功能。CCK8結(jié)果表明SETD7的表達(dá)能影響細(xì)胞增殖;通過流式細(xì)胞術(shù)來檢測(cè)細(xì)胞的周期和凋亡，我們發(fā)現(xiàn)SETD7能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期來影響細(xì)胞的增殖。為了進(jìn)一步探究SETD7對(duì)基因表達(dá)的影響進(jìn)而對(duì)其潛在的功能進(jìn)行預(yù)測(cè)，我們通過數(shù)字基因表達(dá)譜分析(DGE)來探索與SETD7表達(dá)相關(guān)的靶基因，并通過WesternBlot、QRT-PCR來對(duì)DGE結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明SET

6、D7的表達(dá)會(huì)影響ZBTB20以及CDKN2D的表達(dá)水平，通過免疫組化，我們發(fā)現(xiàn)SETD7的表達(dá)與ZBTB20以及CDKN2D具有相關(guān)性。
　　綜上所述，SETD7在肝癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織，而且SETD7在肝癌組織中的高表達(dá)預(yù)示著肝癌的高復(fù)發(fā)、高轉(zhuǎn)移、直徑較大(＞5cm)、低分化;SETD7在肝癌中的表達(dá)與H3K4me2相關(guān);SETD7高表達(dá)的肝癌患者預(yù)后較差;SETD7在肝癌中的表達(dá)與ZBTB20以及CDKN2D具有相關(guān)性;