骨膜蛋白在慢性鼻-鼻竇炎不同表型中差異表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、依據(jù)EPOS2012，鼻鼻竇炎被定義為:鼻腔和鼻竇的炎癥，具有兩個(gè)或兩個(gè)以上的癥狀特征，其中一個(gè)必備條件是鼻塞/鼻堵，或鼻漏（前后鼻孔滴漏），可以伴或不伴面部疼痛/壓迫感、嗅覺(jué)減退或喪失;并且鼻內(nèi)鏡檢查所見(jiàn):鼻腔息肉，并且/或伴有主要來(lái)源于中鼻道的黏膿性分泌物，并且/或伴有主要位于中鼻道的黏膜水腫或阻塞;或CT檢查:伴有竇口鼻道復(fù)合體和/或鼻竇的黏膜改變1。慢性鼻-鼻竇炎的癥狀持續(xù)時(shí)間不少于12周，并且癥狀未徹底消失。在臨床上，可將慢性

2、鼻-鼻竇炎(CRS)分為慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)和慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉(CRSsNP)，對(duì)于慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉，有學(xué)者依據(jù)鼻息肉中浸潤(rùn)細(xì)胞的種類和數(shù)量，把慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉分為嗜酸性粒細(xì)胞型、中性粒細(xì)胞型、非嗜酸性粒細(xì)胞非中性粒細(xì)胞型2。不同的慢性鼻-鼻竇炎表型，其各自的內(nèi)在病理生理學(xué)特點(diǎn)存在差異，這種差異可能預(yù)示不同的發(fā)病機(jī)制，識(shí)別不同的發(fā)病機(jī)制可通過(guò)特定的生物標(biāo)志物來(lái)完成，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些生物學(xué)標(biāo)志物，如血液中

3、特異性IgE、金黃色葡萄球菌內(nèi)毒素IgE等，可作為慢性鼻-鼻竇炎的不同內(nèi)在型的生物標(biāo)志物3，并且針對(duì)不同內(nèi)在型的標(biāo)志物可以選擇個(gè)體化的治療4，5。
　　研究報(bào)道骨膜蛋白(Periostin)是嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘患者呼吸道炎癥的全身性生物標(biāo)志物6,7，參與哮喘患者呼吸道黏膜上皮下組織纖維化等結(jié)構(gòu)重塑8,9。上下呼吸道常常同時(shí)存在炎癥10，組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)與哮喘患者下呼吸道結(jié)構(gòu)重塑相一致，在慢性鼻-鼻竇炎患者鼻腔鼻竇組織中也存在結(jié)構(gòu)

4、重塑11。由此推測(cè)，在慢性鼻-鼻竇炎的組織中，可能存在骨膜蛋白的表達(dá)，這種表達(dá)在不同的慢性鼻-鼻竇炎表型可能具有差異，這種差異對(duì)于認(rèn)識(shí)慢性鼻-鼻竇炎的內(nèi)在分型具有重要意義，與慢性鼻-鼻竇炎的發(fā)病機(jī)制有一定的關(guān)系。
　　在哮喘患者中，血清中升高的骨膜蛋白與一種特殊的哮喘表型嗜酸性粒細(xì)胞型哮喘有一定關(guān)系，并且經(jīng)常合并有阻塞性肺功能障礙和鼻部疾病12，在Th2型（IL-5、IL-13高表達(dá)）、伴有較高的嗜酸性粒細(xì)胞的哮喘表型中，與血中嗜

5、酸性粒細(xì)胞數(shù)、痰中嗜酸性粒細(xì)胞相比，血清中骨膜蛋白對(duì)于檢測(cè)氣流受限具有更高的敏感性13，血清中骨膜蛋白可以作為哮喘的生物標(biāo)志物，主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面:一是作為Ⅱ型免疫反應(yīng)的生物標(biāo)志物代替指標(biāo)，二是作為反映組織重塑或纖維化的生物標(biāo)志物14。已有研究發(fā)現(xiàn)在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉中，59.6％存在嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)浸潤(rùn)，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)在慢性鼻-鼻竇炎(CRS)的病理生理過(guò)程中處于中心位置15。在嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉中，骨膜

6、蛋白的表達(dá)可能與嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)有一定的關(guān)系，進(jìn)而可能與嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉的形成有關(guān)。
　　目的:我們的研究旨在觀察骨膜蛋白在慢性鼻-鼻竇炎不同表型的表達(dá)，分析其在慢性鼻-鼻竇炎病理生理過(guò)程中的作用，為慢性鼻-鼻竇炎的內(nèi)在分型提供可能的依據(jù)。
　　方法:選擇住院患者，分為慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組(CRSsNP、19例)、慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組(CRSwNP、36例)、鼻中隔偏曲組（DNS、15例）。分

7、別留取慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組的篩竇黏膜和慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組患者的篩竇黏膜組織與鼻息肉組織、鼻中隔偏曲患者的下鼻甲組織作為標(biāo)本，對(duì)慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組標(biāo)本進(jìn)行HE染色，依據(jù)嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，將慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組分為嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組(ECRSwNP)和非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組(NonECRSwNP)，對(duì)四組標(biāo)本進(jìn)行骨膜蛋白免疫組織化學(xué)染色(IHC)、實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒?/p>

8、應(yīng)(RT-PCR)，觀察骨膜蛋白分子及mRNA在四組標(biāo)本的表達(dá);通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)四組患者血清中骨膜蛋白的濃度。并對(duì)局部組織中免疫組織化學(xué)染色評(píng)分、骨膜蛋白mRNA、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和血清中骨膜蛋白濃度、血液中嗜酸性粒細(xì)胞比例分別進(jìn)行各指標(biāo)間相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:骨膜蛋白免疫組化染色顯示，骨膜蛋白在四組標(biāo)本中的表達(dá)主要位于鼻黏膜上皮的基底膜、上皮下的纖維組織。慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組（篩竇黏膜）、嗜酸性粒

9、細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組（篩竇黏膜、鼻息肉）、非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組（篩竇黏膜、鼻息肉）和鼻中隔偏曲組（下鼻甲黏膜）的免疫組化染色評(píng)分分別為3.19±0.98、3.90±0.42/4.17±0.52、3.20±0.86/3.32±0.84和2.44±0.86，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組以及非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組評(píng)分高于鼻中隔偏曲組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

10、0.05、P＜0.01、P＜0.01)。嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組高于其他三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組之間相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附方法測(cè)得四組患者血清中的骨膜蛋白濃度，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組和鼻中隔偏曲組血清中骨膜蛋白濃度分別

11、為47962.77±14307.30、72138.91±21722.43、43012.45±10314.95和31337.81±8181.02pg/ml。嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，鼻中隔偏曲組低于其他三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組與非嗜酸性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。四組患者鼻黏膜組織中均有骨膜蛋白mRNA

12、，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組和鼻中隔偏曲組鼻黏膜組織骨膜蛋白mRNA分別為0.351156±0.250896、0.477044±0.505552、0.326074±0.412194和0.340352±0.304540，與鼻中隔偏曲組相比，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組鼻黏膜組織中

13、骨膜蛋白mRNA升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在嗜酸性粒細(xì)胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組，鼻息肉組織中骨膜蛋白分子的表達(dá)與局部組織（篩竇黏膜、鼻息肉）中嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)具有一定相關(guān)性(P＜0.01，P＜0.05)，血清骨膜蛋白濃度與血中嗜酸性粒細(xì)胞比例具有一定的相關(guān)性(P＜0.01)。在四組標(biāo)本中，局部組織中骨膜蛋白分子的表達(dá)與血中嗜酸性粒細(xì)胞比例無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。篩竇黏膜骨膜蛋白mRNA的表達(dá)與局部組織中嗜酸性