版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種以軟骨細(xì)胞凋亡、軟骨基質(zhì)破壞、軟骨下骨骨化、骨贅形成及滑膜炎癥反應(yīng)為特征的綜合性慢性疾病,好發(fā)于中老年人,給我國的醫(yī)療及經(jīng)濟(jì)帶來巨大負(fù)擔(dān)。骨關(guān)節(jié)炎的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,目前認(rèn)為軟骨基質(zhì)合成和降解的平衡失調(diào),導(dǎo)致軟骨基質(zhì)破壞是關(guān)節(jié)退化的主要原因。早期的治療主要包括口服非甾體類消炎藥及關(guān)節(jié)腔注射透明質(zhì)酸及激素,但這些手段只能緩解疼痛,病情易反復(fù),并容易帶來消化系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)的副作用
2、。
芍藥苷(Paeoniflorin,PF)是從中藥白芍總苷中提取的單萜類糖苷化合物,來源于芍藥科植物芍藥根、牡丹根、紫牡丹根。由于其中藥單體成分明確,近年來國內(nèi)外大量學(xué)者對其藥理藥效作用進(jìn)行了廣泛的研究,發(fā)現(xiàn)其具有擴(kuò)張血管、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗炎抗?jié)儭⒖棺杂苫趸瘬p傷、解熱解痙等作用。在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中,PF能下調(diào)炎性因子如白介素1、6、17及腫瘤壞死因子的表達(dá),并上調(diào)抗炎因子TGF-β的水平,從而對RA起到治療作用。在脊柱
3、退變模型的實(shí)驗中,研究者發(fā)現(xiàn)口飼一定劑量的芍藥苷能降低大鼠髓核細(xì)胞中Bax的含量,同時下調(diào)相關(guān)凋亡因子的表達(dá),從而抑制髓核細(xì)胞的凋亡,對脊柱退行性改變起到保護(hù)作用。目前基于芍藥苷與軟骨細(xì)胞的研究探索比較少,我們想通過本研究,明確芍藥苷在骨性關(guān)節(jié)炎病理過程中,是否可以抑制軟骨細(xì)胞凋亡及軟骨基質(zhì)破壞,從而發(fā)揮關(guān)節(jié)保護(hù)作用。
本研究主要分三部分:一、首先通過體外培養(yǎng)大鼠軟骨細(xì)胞,加入不同濃度的PF干預(yù)后,用白介素-1β進(jìn)行刺激,檢測
4、軟骨細(xì)胞中MMPs、TIMP-1基因及蛋白表達(dá)的差異,并進(jìn)一步通過分析檢測NF-κB通路的相關(guān)蛋白表達(dá)水平來明確PF作用機(jī)制。我們的研究表明一定濃度的PF能抑制IL-1β介導(dǎo)的MMPs分泌,并上調(diào)TIMP-1的表達(dá),從而拮抗IL-1β介導(dǎo)的軟骨降解,并且該作用通過部分抑制NF-κB通路得以實(shí)現(xiàn)。二、在體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞中,觀察PF對IL-1β介導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡的影響。通過PF干預(yù)后,檢測軟骨細(xì)胞凋亡率、凋亡相關(guān)調(diào)節(jié)基因表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)PF
5、能上調(diào)Bcl-2家族表達(dá)并抑制Bax表達(dá),抑制Caspase-3活性,從而拮抗IL-1β介導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡。三、觀察在ACLT動物模型中,關(guān)節(jié)腔注射PF對關(guān)節(jié)軟骨的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)一定濃度的PF可減輕關(guān)節(jié)軟骨損傷。我們的研究結(jié)果表明,PF很可能通過發(fā)揮抗炎及抗凋亡作用從而對關(guān)節(jié)軟骨起到保護(hù)作用。
第一部分 PF對大鼠軟骨細(xì)胞中MMPs/TIMP-1表達(dá)的影響
目的:觀察PF對IL-1β介導(dǎo)軟骨細(xì)胞MMPs/TIMP-1
6、表達(dá)的影響及其分子機(jī)制。
方法:取4周齡SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織,用酶消化法行體外培養(yǎng),傳代至3代穩(wěn)定后,MTT法檢測不同濃度PF對軟骨細(xì)胞活性影響,選取合適濃度范圍的PF用于后續(xù)實(shí)驗。加入不同濃度的PF預(yù)處理3小時,之后再加入IL-1β10ng/ml培養(yǎng)24小時,用實(shí)時定量PCR法檢測MMP-1,MMP-3,MMP-13及TIMP-1的基因表達(dá),western blot檢測MMP-1,MMP-3,MMP-13,TIMP-1、核
7、轉(zhuǎn)錄因子p65亞基和轉(zhuǎn)錄抑制因子(Inhibitor of nuclear factor kappa B,IκB-α)的蛋白表達(dá)。
結(jié)果:PF能抑制IL-1β介導(dǎo)的MMPs基因及蛋白表達(dá),并上調(diào)軟骨細(xì)胞中的TIMP-1水平。同時PF能抑制IL-1β介導(dǎo)的IκB-α降解和NF-κB磷酸化。
結(jié)論:PF可通過抑制NF-κB信號通路拮抗IL-1β介導(dǎo)的MMPs基因及蛋白表達(dá),并上調(diào)TIMP-1水平。
第二部分 P
8、F對IL-1β介導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞凋亡的影響
目的:觀察PF對IL-1β介導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞凋亡的影響及其分子機(jī)制探討。
方法:體外培養(yǎng)SD大鼠軟骨細(xì)胞,待細(xì)胞活性穩(wěn)定后,用不同濃度PF預(yù)處理3小時,之后加入IL-1β10ng/ml培養(yǎng)24小時,通過乳酸脫氫酶活性檢測及流式細(xì)胞檢測明確PF對軟骨細(xì)胞凋亡的作用,Caspase-3活性試劑盒檢測Caspase-3活性,實(shí)時定量PCR法檢測Bcl-2及Bax基因表達(dá),West
9、ern blot檢測Bcl-2,Bax,總Akt和磷酸化Akt的蛋白表達(dá)。
結(jié)果:PF能通過上調(diào)Akt磷酸化,拮抗IL-1β介導(dǎo)的LDH釋放及抑制軟骨細(xì)胞的凋亡,并上調(diào)Bcl-2表達(dá),抑制Bax表達(dá)及Caspase-3活性。
結(jié)論:PF能抑制IL-1β介導(dǎo)的LDH釋放,透過流式細(xì)胞技術(shù)PF能拮抗IL-1β介導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步的分析表明PF能通過上調(diào)Bcl-2基因及蛋白表達(dá),并下調(diào)Bax水平,同時降低Caspas
10、e-3的活性來發(fā)揮凋亡作用。該作用與Akt通路密切相關(guān)。
第三部分 PF對兔OA模型的保護(hù)作用
目的:通過建立動物模型進(jìn)一步觀察驗證PF對骨關(guān)節(jié)炎的保護(hù)作用。
方法:32只新西蘭兔均分為正常組、空白組、低劑量PF組及高劑量PF組。后三組共24只行單側(cè)前交叉韌帶離斷法制作OA模型。建模4周后,分別予0.3mlDMSO、0.3ml低劑量PF(25μM)及0.3ml高劑量PF(50μM)注射,每周一次,持續(xù)5周。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Vaspin在骨性關(guān)節(jié)炎中的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 丹皮酚在骨性關(guān)節(jié)炎中的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 黃芩素抗骨性關(guān)節(jié)炎的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 硫化氫在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf
- 玻璃酸鈉在肘關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中的治療作用分析
- SY膠囊對膝骨性關(guān)節(jié)炎的治療作用及其機(jī)制研究.pdf
- Sirt6對骨性關(guān)節(jié)炎的調(diào)控作用及其機(jī)制研究.pdf
- 骨性關(guān)節(jié)炎
- 降鈣素對大鼠膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎潛在保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf
- 加味芍藥甘草湯治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床研究.pdf
- 骨性關(guān)節(jié)炎
- 常山酮對骨性關(guān)節(jié)炎的作用及機(jī)制研究.pdf
- FGFR3在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生和發(fā)展中的作用和機(jī)制研究.pdf
- 簡述骨性關(guān)節(jié)炎及其治療
- 佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠腹腔巨噬細(xì)胞異常功能變化及木瓜苷和芍藥苷的作用.pdf
- 骨性關(guān)節(jié)炎護(hù)理
- 右膝骨性關(guān)節(jié)炎
- 骨性關(guān)節(jié)炎防治研究.pdf
- 醫(yī)用臭氧水對兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制研究.pdf
- 骨性關(guān)節(jié)炎的防治
評論
0/150
提交評論