全反式維甲酸對(duì)食管癌細(xì)胞系Eca109VEGF和bFGF表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　食管癌是發(fā)病率較高、預(yù)后較差的實(shí)體腫瘤之一。腫瘤直徑小于1mm時(shí)，可以通過自身滲透作用為之提供營養(yǎng)，當(dāng)腫瘤直徑達(dá)到1-2mm時(shí)，腫瘤內(nèi)部發(fā)生了血管的新生現(xiàn)象，可以為腫瘤的生長提供充足的營養(yǎng)，新生血管可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移。多種生長因子共同參與調(diào)節(jié)著腫瘤血管的生成。其中我們研究最為廣泛和深入的生長因子是血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），主要調(diào)控著腫瘤血管的生成，促進(jìn)了多種惡性腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移。另一類較大的生長因子家族

2、是成纖維生長因子（FGF）家族，其中bFGF是第一個(gè)被鑒定的促血管生成因子，在血管生成中也起著重要的調(diào)節(jié)作用。
　　誘導(dǎo)分化概念的提出，為腫瘤的治療提供了一種新的、有效的治療理念。越來越多的腫瘤專家開始關(guān)注誘導(dǎo)分化治療的研究進(jìn)展。全反式維甲酸（ATRA）作為一種最重要的誘導(dǎo)分化劑，已經(jīng)在白血病及部分實(shí)體腫瘤中得到應(yīng)用。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)觀察ATRA對(duì)食管癌細(xì)胞系Eca109中VEGF、bFGF蛋白和mRNA表達(dá)的影響，為ATRA在

3、食管癌抗血管生成的治療提供理論依據(jù)。
　　目的:
　　研究不同濃度ATRA對(duì)食管癌細(xì)胞系Eca109 VEGF和bFGF表達(dá)的影響。
　　方法:
　　終濃度分別為0、1、5、10μmol/L的ATRA作用于人食管癌Eca109細(xì)胞，采用噻唑藍(lán)比色法（MTT）評(píng)價(jià)藥物對(duì)細(xì)胞的增殖抑制情況；通過劃痕實(shí)驗(yàn)測定ATRA作用于Eca10948h前后的遷移能力；采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)法和逆轉(zhuǎn)錄酶聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）分別

4、檢測不同濃度ATRA作用于Eca10948h后VEGF、bFGF蛋白和mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果
　　1．MTT結(jié)果：作用于24h后，實(shí)驗(yàn)組，即1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L組的增殖抑制率分別為：（44.57±1.36）％、（50.26±1.64）%、（54.24±1.39）%；48h后，上述實(shí)驗(yàn)組的增殖抑制率分別為：（54.29±0.15）%、（59.52±0.74）%、（65.45±4.33）%；7

5、2h后，上述實(shí)驗(yàn)組的增殖抑制率分別為：（66.39±0.87）%、（74.33±2.69）%、（85.24±1.49）%。而對(duì)照組，0μmol/L組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的抑制率均為0.00%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組之間進(jìn)行兩兩比較，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2．劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca10948h后，細(xì)胞的遷移率分別為（

6、50.82±1.61）%，（46.80±5.12）%，（32.31±3.25）%，對(duì)照組（68.81±2.64）%。0h各組細(xì)胞的遷移率均為0.00%。實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)分別與對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3．免疫組化結(jié)果：VEGF蛋白陽性表達(dá)體現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)的棕黃或棕褐色顆粒狀，主要分布于細(xì)胞質(zhì)，核膜亦可見陽性表達(dá)。bFGF蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞核內(nèi)被染成棕

7、黃色，并且胞漿、核膜可見陽性表達(dá)。0、1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca10948h后，細(xì)胞內(nèi)VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量依次為：（85.43±0.53）×10-2、（77.45±0.51）×10-2、（51.43±0.34）×10-2、（21.74±0.11）×10-2；bFGF蛋白的相對(duì)表達(dá)量依次為：（71.41±0.52）×10-2、（51.63±0.46）×10-2、（38.44±0.32）×10-2、（11.24±0.2

8、1）×10-2。可以看出，隨著藥物濃度的增加，各個(gè)指標(biāo)的相對(duì)表達(dá)量逐漸減少，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組之間進(jìn)行兩兩比較，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4．PCR結(jié)果：0、1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca109細(xì)胞48h后，VEGF mRNA表達(dá)量依次為：（12.40±1.11）×10-2、（7.27±0.71）×10-2、（4.63±0.45

9、）×10-2、（1.62±0.25）×10-2；bFGF mRNA表達(dá)量依次為：（17.96±0.46）×10-2、（15.32±0.33）×10-2、（12.04±0.50）×10-2、（9.13±0.30）×10-2?？梢钥闯?，隨著藥物濃度的增加，各個(gè)指標(biāo)的表達(dá)量逐漸減少，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且實(shí)驗(yàn)組之間進(jìn)行兩兩比較，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論: