缺氧誘導(dǎo)因子2(HIF-2α)在胰腺癌中調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、缺氧誘導(dǎo)因子2（HIF-2α）在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：研究缺氧誘導(dǎo)因子2（HIF-2α）在胰腺癌和癌旁非癌胰腺組織中的表達(dá)，并進(jìn)一步探究HIF-2α在胰腺癌中的臨床意義。
　　方法：
　　（1）用免疫組織化學(xué)法（immunohistochemistry,IHC）檢測70例胰腺癌患者癌組織和癌旁非癌胰腺組織標(biāo)本中HIF-2α蛋白的表達(dá)。
　?。?）分析70例胰腺癌組織中HIF-2α表達(dá)與臨床

2、病理因素之間的相關(guān)性。
　　（3）用IHC檢測70例胰腺癌中上皮鈣依賴粘附蛋白（E-cadherin）表達(dá)情況，并分析E-cadherin與HIF-2α表達(dá)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　?。?）HIF-2α主要表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)及胞核，在胰腺癌組織中陽性率為67.1％（47/70），在相應(yīng)非癌胰腺組織中陽性率為11.4%（8/70）。HIF-2α在胰腺癌組織中的陽性率明顯高于非癌胰腺組織，兩者的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=45.5

3、49，P<0.05），而且HIF-2α的表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　?。?）胰腺癌患者中胰腺癌組織的E-cadherin表達(dá)水平（21/70）明顯低于相應(yīng)癌旁正常胰腺組織（43/70），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=13.931，P<0.05）。
　?。?）胰腺癌組織中HIF-2α的表達(dá)與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（Spearman，r=-0.394，P<0

4、.05）。
　　結(jié)論：HIF-2α蛋白在胰腺癌中高表達(dá)，并且胰腺癌組織中HIF-2α蛋白的高表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。E-cadherin在胰腺癌組織中低表達(dá)，且胰腺癌組織中HIF-2α的表達(dá)與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，提示在胰腺癌中HIF-2α可能通過調(diào)控E-cadherin的表達(dá)促進(jìn)EMT的發(fā)生，參與胰腺癌的侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　第二部分、在胰腺癌細(xì)胞中HIF-2α調(diào)控EMT的作用及其調(diào)控

5、機(jī)制研究
　　目的：觀察在胰腺癌細(xì)胞中HIF-2α對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymaltransition,EMT）的作用，并進(jìn)一步探討可能的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　（1）構(gòu)建針對HIF-2α基因的小干擾RNA載體和過表達(dá)載體，通過慢病毒轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞，采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測靶向調(diào)控HIF-2α的效果。
　?。?）在胰腺癌細(xì)胞中調(diào)控HIF-2α的表達(dá)后，

6、通過侵襲實驗（cell invasion assay）和劃痕實驗（wound healing assay）觀察HIF-2α對胰腺癌細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響，并通過Western blot檢測HIF-2α對EMT相關(guān)蛋白的作用。
　　（3）在胰腺癌細(xì)胞中調(diào)控HIF-2α后通過Western blot檢測EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Twist1/2表達(dá)的變化。
　　（4）通過染色質(zhì)免疫共沉淀（chromatin immunoprecipi

7、tation assay，ChIP）方法研究Twist1/2與EMT特異性蛋白E-cadherin的作用與位點。
　?。?）在胰腺癌組織中通過 IHC檢測Twist1/2和E-cadherin的表達(dá)，分析其相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　?。?）上調(diào)HIF-2α表達(dá)后，胰腺癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，下調(diào)HIF-2α表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力下降。
　?。?）在胰腺癌細(xì)胞中 HIF-2α調(diào)控EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)，即

8、上調(diào)HIF-2α后，E-caherin表達(dá)下降（P<0.01），MMP2和MMP9的表達(dá)上升（P<0.01）；下調(diào)HIF-2α后，E-caherin表達(dá)上升（P<0.01），而MMP2和MMP9的表達(dá)下降（P<0.01）。
　?。?）在胰腺癌細(xì)胞中HIF-2α調(diào)控Twist1/2的表達(dá)，Twist2可與E-cadherin的啟動子區(qū)結(jié)合。
　　結(jié)論：在胰腺癌細(xì)胞中HIF-2α參與EMT的發(fā)生發(fā)展，促進(jìn)胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。EM