基因沉默缺氧誘導因子-1α在結直腸癌的缺氧與上皮-間質轉化中作用的研究.pdf

1、目的：通過研究基因沉默缺氧誘導因子-1α（HIF-1α），對結直腸癌SW480細胞的生長增殖、侵襲遷移能力及對鋅指轉錄因子Snail與上皮鈣黏蛋白E-cadherin表達的影響，探討其在結直腸癌的缺氧及上皮-間質轉化（EMT）過程中的作用與機制。
　　方法：利用氯化鈷（CoCl2）化學誘導建立結直腸癌SW480細胞的缺氧模型，設計合成HIF-1α的小干擾RNA（HIF-1α-siRNA）并將其轉染入細胞內，實驗分組：空白對照組（未

2、作轉染）、陰性對照組（轉染和選中的siRNA序列組成相同，但無明顯同源性的序列）和基因干擾組（轉染HIF-1α-siRNA）。通過四甲基偶氮唑蘭（MTT）法檢測細胞的體外生長增殖活性，體外侵襲實驗（Transwell法）檢測細胞的體外侵襲遷移能力，逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）及免疫蛋白印跡（Western blot）檢測細胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA與蛋白的表達情況。
　　結果：MTT法檢測結

3、果顯示，缺氧條件下，與陰性對照組、空白對照組比較，基因干擾組OD值及細胞存活率均降低（P<0.05）；Transwell法檢測結果顯示，空白對照組和陰性對照組穿過基質膠和聚碳酸酯膜的細胞多且大部分被蘇木素藍染，而基因干擾組僅有極少量細胞穿膜并被藍染,提示其侵襲遷移率降低（P<0.05）；RT-PCR與Western blot檢測結果顯示，與空白對照組、陰性對照組比較，基因干擾組結直腸癌SW480細胞中的HIF-1α和Snail mRNA

4、和蛋白的表達明顯降低，E-cadherin mRNA和蛋白的表達明顯增強（P<0.05）；對三種因子進行相關性分析，結果顯示HIF-1α和Snail的表達呈顯著正相關，HIF-1α和E-cadherin的表達呈顯著負相關，Snail與E-cadherin基因的表達呈顯著負相關（P<0.05）。
　　結論：⑴RNA干擾沉默HIF-1α基因可抑制結直腸癌SW480細胞的體外生長增殖和體外侵襲遷移能力；⑵結直腸癌 SW480細胞中 HI