基因沉默缺氧誘導(dǎo)因子-1α在結(jié)直腸癌的缺氧與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中作用的研究.pdf

1、目的：通過研究基因沉默缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α），對結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞的生長增殖、侵襲遷移能力及對鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail與上皮鈣黏蛋白E-cadherin表達(dá)的影響，探討其在結(jié)直腸癌的缺氧及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程中的作用與機(jī)制。
　　方法：利用氯化鈷（CoCl2）化學(xué)誘導(dǎo)建立結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞的缺氧模型，設(shè)計(jì)合成HIF-1α的小干擾RNA（HIF-1α-siRNA）并將其轉(zhuǎn)染入細(xì)胞內(nèi)，實(shí)驗(yàn)分組：空白對照組（未

2、作轉(zhuǎn)染）、陰性對照組（轉(zhuǎn)染和選中的siRNA序列組成相同，但無明顯同源性的序列）和基因干擾組（轉(zhuǎn)染HIF-1α-siRNA）。通過四甲基偶氮唑蘭（MTT）法檢測細(xì)胞的體外生長增殖活性，體外侵襲實(shí)驗(yàn)（Transwell法）檢測細(xì)胞的體外侵襲遷移能力，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及免疫蛋白印跡（Western blot）檢測細(xì)胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA與蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：MTT法檢測結(jié)

3、果顯示，缺氧條件下，與陰性對照組、空白對照組比較，基因干擾組OD值及細(xì)胞存活率均降低（P<0.05）；Transwell法檢測結(jié)果顯示，空白對照組和陰性對照組穿過基質(zhì)膠和聚碳酸酯膜的細(xì)胞多且大部分被蘇木素藍(lán)染，而基因干擾組僅有極少量細(xì)胞穿膜并被藍(lán)染,提示其侵襲遷移率降低（P<0.05）；RT-PCR與Western blot檢測結(jié)果顯示，與空白對照組、陰性對照組比較，基因干擾組結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞中的HIF-1α和Snail mRNA

4、和蛋白的表達(dá)明顯降低，E-cadherin mRNA和蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.05）；對三種因子進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示HIF-1α和Snail的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，HIF-1α和E-cadherin的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，Snail與E-cadherin基因的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　結(jié)論：⑴RNA干擾沉默HIF-1α基因可抑制結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞的體外生長增殖和體外侵襲遷移能力；⑵結(jié)直腸癌 SW480細(xì)胞中 HI