膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜血管翳中的免疫定位研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以侵蝕性關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主要表現(xiàn)的慢性、系統(tǒng)性自身免疫性疾病，血管翳是 RA病變過(guò)程中一個(gè)特征性的病理產(chǎn)物，主要是由新生血管、增生肥大的滑膜細(xì)胞、浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞及機(jī)化的纖維素構(gòu)成，是引起關(guān)節(jié)病變、軟骨破壞的主要原因及病理基礎(chǔ)[1]，而血管新生則是構(gòu)成和維持血管翳的關(guān)鍵。RA的新生血管可將炎性細(xì)胞輸送到炎性部位，并給增生的滑膜組織提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣以

2、維持關(guān)節(jié)局部的慢性炎癥狀態(tài)。血管新生還與骨和軟骨的破壞密切相關(guān)，有研究證明[2]抑制滑膜新生血管可以降低關(guān)節(jié)炎患者病情活動(dòng)度的得分，可有效緩解RA的病情。
　　基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一組活性依賴于 Zn＋、Ca＋等金屬離子且結(jié)構(gòu)和功能同源的內(nèi)肽酶家族，不僅能直接降解骨和軟骨，還可通過(guò)刺激內(nèi)皮細(xì)胞，使血管再生形成血管翳，增加血管翳對(duì)軟骨的侵襲，參與關(guān)節(jié)軟骨及骨組織降解、破壞[

3、3]。膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1(membrane type MMP-1，MT1-MMP)是MT-MMPs家族的成員，目前大量研究發(fā)現(xiàn)MT1-MMP在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，而RA是以“類腫瘤樣”的方式向關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)侵襲性生長(zhǎng)，因此我們推測(cè)MT1-MMP可能在RA的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，且已有研究發(fā)現(xiàn)[4]MT1-MMP在RA患者關(guān)節(jié)滑膜組織中高表達(dá)并在滑膜血管翳侵蝕軟骨組織過(guò)程中發(fā)揮作用，但其在RA滑膜組織血管翳中的具體免疫定位尚不清

4、楚。
　　因此本研究主要通過(guò)觀察MT1-MMP在RA滑膜組織中滑膜細(xì)胞、新生血管及相關(guān)免疫細(xì)胞上的表達(dá)情況，明確其在 RA滑膜血管翳中的免疫定位，初步了解MT1-MMP在RA滑膜血管翳的形成中發(fā)揮的作用，為RA提供新的治療靶點(diǎn)。
　　材料與方法：
　　本研究收集了蘇大附三院骨科經(jīng)關(guān)節(jié)鏡下手術(shù)切除的活動(dòng)期 RA患者膝關(guān)節(jié)滑膜組織作為研究對(duì)象，所有標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林固定、脫水、石蠟包埋、以3μm連續(xù)切片等程序制片，病理

5、通過(guò)HE染色證實(shí)，采用兔抗人MT1-MMP單克隆抗體進(jìn)行免疫組化、免疫組織雙重?zé)晒馊旧?；運(yùn)用激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)MT1-MMP在RA滑膜組織中滑膜細(xì)胞、新生血管及相關(guān)免疫細(xì)胞上的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　RA患者滑膜組織HE染色結(jié)果可見(jiàn)明顯的滑膜細(xì)胞增生、血管形成及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，即RA特征性的病理改變血管翳；免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示在RA患者滑膜組織中可檢測(cè)到 MT1-MMP的陽(yáng)性表達(dá)，進(jìn)一步通過(guò)雙重免疫熒光標(biāo)記及激光共

6、聚焦方法我們發(fā)現(xiàn) MT1-MMP可表達(dá)在 RA患者滑膜組織上被覆的滑膜細(xì)胞及CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞上，而且在Ki-67+的高度增殖滑膜細(xì)胞上高表達(dá)，在CD14+單核細(xì)胞及CD68+巨噬細(xì)胞上也呈陽(yáng)性表達(dá)，而在CD3+T細(xì)胞、CD20+B細(xì)胞及CD57+NK細(xì)胞上呈弱表達(dá)或不表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　MT1-MMP可表達(dá)于滑膜細(xì)胞、CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞及相關(guān)炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞CD14+單核細(xì)胞及CD68+巨噬細(xì)胞上，參與了RA的滑膜