溫腎健脾法對潰瘍性結腸炎大鼠結腸組織IFN-γ、TGF-β1、NOD2、SIGIRR表達的影響.pdf

1、目的：①潰瘍性結腸炎的病因病機較為復雜，其證候類型繁多，諸多醫(yī)家采用辨證論治進行治療，臨床上取得了較好療效。但其證候類型和治法過于分散，因此有效的治法和方藥規(guī)律探討不夠深入，臨床推廣受限。研究采用頻數(shù)分析的方法，對近年來關于潰瘍性結腸炎的病機和治法進行歸納分析，探討潰瘍性結腸炎的常見病機和治法，為臨床選方及深入研究提供文獻學依據(jù)。②四神丸是臨床報道治療脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎的有效方，但其治療潰瘍性結腸炎的作用機制不明。研究通過觀察四神丸

2、對脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎模型大鼠血清及結腸IFN-γ、TGF-β1因子的含量及結腸組織NOD2、SIGIRR基因和蛋白表達的影響，探討四神丸治療脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎的分子機制，為該方的進一步推廣應用和開發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　方法：采用番瀉葉灌胃+氫化可的松腹腔注射[1]+TNBS/乙醇混懸液灌腸復制脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎大鼠模型。從大鼠的一般狀態(tài)、結腸損傷情況、病理學改變等對模型進行評價。實驗大鼠隨機分為空白組，模型組，SASP

3、組，四神丸低、中、高劑量組。SASP組按0.36g/kg/d的生藥劑量灌胃。四神丸低、中、高劑量組分別按生藥2.5、5、10g/kg/d的劑量灌胃?？瞻捉M、模型組采用等體積蒸餾水灌胃，連續(xù)治療21d。采用ELISA法檢測大鼠組織及血清中IFN-γ、TGF-β1因子含量的變化；采用RT-qPCR法和Western Blot法檢測大鼠結腸NOD2、SIGIRR基因和蛋白表達的變化。探討IFN-γ、TGF-β1、NOD2、SIGIRR的表達變

4、化及四神丸的干預作用。
　　結果：⑴一般狀態(tài)：空白組大鼠毛發(fā)干凈順滑，精神尚佳，飲食規(guī)律，大便正常，在造模與治療期間無明顯變化。模型組大鼠在造模完成后，外觀來看，出現(xiàn)毛發(fā)污穢，精神不佳，嗜臥不活躍，大便質稀，爪甲顏色較淡，尾巴變涼，弓背倦怠，喜扎堆，飲食、飲水量顯著下降等現(xiàn)象。因機體自身存在一定的修復周期，造模后第7天，病癥最為嚴重，第14天開始有一定的改善，而第21天改善較為明顯。但相比其他各治療組，修復效果不佳。通過一段時間內

5、不同藥物及不同劑量的治療，各組大鼠都有了不同層次的修復。SASP組大鼠皮毛略有潔凈，靈活度也略有恢復，精神較正常，活動尚靈敏，飲食尚可，大便基本正常，個別有稀便現(xiàn)象。四神丸組大鼠皮毛光澤，反應靈敏，精神活動可，飲食接近正常，大便呈顆粒狀。其中，中劑量組恢復最好，基本與空白組無異。⑵大體形態(tài)：模型組大鼠結腸黏膜可見明顯的充血、水腫、潰瘍，腸壁變厚、腸道縮短等，證實模型復制成功(P<0.01)。經(jīng)過3種劑量的四神丸和SASP治療后，大鼠結腸

6、黏膜損傷情況均有改善，但各組具體的修復情況不全相同。其中，SASP組、四神丸中、高劑量組中的大鼠黏膜僅存在少量的充血水腫，中劑量組損傷基本恢復至正常形態(tài)。四神丸組、SASP組與模型對照組對比，結腸損傷評分均降低(P<0.01)。⑶病理改變：空白組結腸組織結構清晰，粘膜完整，無潰瘍、炎癥等形成，未見明顯異常；模型組結腸結構不清晰，被大量炎癥細胞浸潤，深達肌層，潰瘍形成，結腸全層增厚；SASP組、中藥低劑量組、中藥高劑量組上皮有不同程度的恢

7、復，肌層也略有修復，但仍有斷裂存在，結腸仍存在少量炎癥細胞；中藥中劑量組結腸結構相對完整、清晰，已接近正常組織結構。⑷ELISA法檢測IFN-γ、TGF-β1含量：與空白組比較，模型組大鼠IFN-γ的表達不論在組織還是血清中都升高（P<0.01），同時，TGF-β1的表達下降（P<0.01）。與模型組比較，各治療組大鼠組織及血清中IFN-γ的含量降低（P<0.01，P<0.05），而TGF-β1含量升高（P<0.01，P<0.05）。⑸

8、RT-qPCR法檢測NOD2、SIGIRR mRNA的表達：與空白組比較，模型組大鼠的NOD2 mRNA基因的表達上升（P<0.01），此外，SIGIRR mRNA的基因表達量降低（P<0.01）；與模型組比較，治療組NOD2 mRNA的表達降低（P<0.05），而SIGIRR mRNA的表達升高（P<0.01，P<0.05）。⑹Western Blot法檢測NOD2、SIGIRR的表達：相比空白組，NOD2在模型組大鼠中的蛋白表達顯著

9、增高（P<0.01），相反，SIGIRR在該組大鼠的表達降低（P<0.01）；與模型組比較，治療組大鼠結腸的NOD2的表達降低（P<0.01），而SIGIRR的表達升高（P<0.05）。
　　結論：①番瀉葉灌胃+氫化可的松注射液腹腔注射+2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法灌腸法能成功的復制脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎大鼠模型。②脾腎陽虛是UC重要且常見的證型，溫腎健脾法是治療 UC的重要治法。③大鼠結腸組織形態(tài)的肉眼觀察與病理