HIF-1α、ERK、Ki-67在rhaFGF處理的腸缺血-再灌注損傷組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：觀察HIF-1α、ERK、Ki-67在rhaFGF處理的腸缺血-再灌注損傷模型大鼠小腸粘膜組織中的表達(dá)水平，探討其與rhaFGF減輕腸缺血-再灌注損傷的關(guān)系。
　　方法：健康雄性Wistar大鼠200只，隨機(jī)分為假手術(shù)（sham）組，腸缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，I/R）組，PD98059組（P組），PD98059+rhaFGF治療組（PR組），rhaFGF治療組（R組），每組40

2、只。采用腸系膜上動脈（SMA）夾閉-松夾方式制備腸缺血-再灌注模型。sham組及I/R組于SMA夾閉前20min舌下靜脈注射生理鹽水(0.1ml/只)；R組和PR缺血前20min舌下靜脈注射rhaFGF(4μg/只)；P組及PR組于缺血前30min舌下靜脈注射PD98059（1.5μl/只）。sham組只分離SMA，暴露45min后處死；其余各組分離SMA后，用微血管夾夾閉45min后松開，縫合切口，皮下注射生理鹽水10ml抗休克。造模

3、成功后，各組依照再灌注時間隨機(jī)分為2、6、12、24h4個亞組，每組10只，按以上時間點(diǎn)處死大鼠，取距離回盲部10cm以上的小腸組織。10％福爾馬林溶液固定，梯度酒精脫水，常規(guī)石蠟包埋，4μm切片，HE法觀察小腸組織粘膜病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)方法檢測HIF-1α、ERK、Ki-67在小腸粘膜組織中的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.HE染色法光鏡下觀察小腸組織粘膜病理學(xué)變化：I/R組小腸在缺血再灌注后發(fā)生的早期病變較輕，表現(xiàn)為粘膜和粘膜

4、下層充血、水腫，大量中性粒細(xì)胞浸潤，亦有粘膜上皮脫落，但數(shù)量較少。再灌注后12小時，病理變化嚴(yán)重，粘膜大片糜爛，大量淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤，再灌注后24小時損傷有所改善。I/R組與PR組組間各時間點(diǎn)比較無顯著差異；P組粘膜損傷較I/R組更加嚴(yán)重。R組腸粘膜組織小腸粘膜充血、水腫、炎性細(xì)胞或上皮糜爛壞死的程度在對應(yīng)各時間點(diǎn)均較I/R組顯著改善。2.免疫組化法檢測HIF-1α在各組大鼠小腸粘膜組織中的表達(dá)：I/R組小腸粘膜組織2

5、、6、12、24h各時間點(diǎn)HIF-1α蛋白表達(dá)水平分別顯著高于sham組及PR、R治療組各對應(yīng)時間點(diǎn)（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；且2-12h時間段，隨時間的延長，蛋白表達(dá)水平越高，12小時達(dá)到峰值，24h有所降低。I/R組與P組組間各時間點(diǎn)比較無顯著性差異（P>0.05），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。PR組及R組腸粘膜組織HIF-1α蛋白表達(dá)水平各時間點(diǎn)顯著低于I/R組各對應(yīng)時間點(diǎn)（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；且R組腸粘膜組織各時間

6、點(diǎn)HIF-1α蛋白表達(dá)水平顯著低于PR組各對應(yīng)時間點(diǎn)蛋白表達(dá)水平（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.I/R組小腸粘膜組織2、6、12、24h各時間點(diǎn)ERK、Ki-67蛋白表達(dá)水平分別顯著高于sham組及P組（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；且2-12h時間段，隨時間的延長，蛋白表達(dá)水平越高，12小時達(dá)到峰值，24h有所降低。P組小腸粘膜組織2、6、12、24h各時間點(diǎn)ERK、Ki-67蛋白表達(dá)水平顯著高于sham組（P<0.05）

7、且顯著低于I/R組（P<0.05）各時間點(diǎn)蛋白水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。PR組與I/R組組間各時間點(diǎn)比較無顯著性差異（P>0.05），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。R組腸粘膜組織ERK、Ki-67蛋白表達(dá)水平各時間點(diǎn)顯著高于I/R組及PR組各對應(yīng)時間點(diǎn)蛋白表達(dá)水平（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.缺血再灌注12h后對組織的損傷最嚴(yán)重，24h有所改善。2.rhaFGF治療能有效減輕I/R對腸道的損傷程度。3.rhaFGF預(yù)處理改