職業(yè)性噪聲聾工人血清miRNAs的表達差異分析.pdf

1、實驗目的：研究職業(yè)性噪聲聾工人與聽力正常工人之間血清中microRNAs(miRNAs)的表達差異。通過實驗篩選并驗證表達差異性miRNAs，并對其進行靶基因的預測和驗證，分析職業(yè)性噪聲聾致病機理，為后續(xù)的研究提供實驗數(shù)據(jù)的支持。
　　實驗方法：1.從病人血樣標本中分離出300-500μL的血清，并對其進行編號、記錄和分裝，并在-80℃冰箱進行長期保存。之后建立血液樣本信息數(shù)據(jù)庫，并從數(shù)據(jù)庫中篩選后續(xù)實驗所需的樣本。2.對血清樣本

2、進行miRNAs的分離與純化。將提取出的總miRNAs用分光光度計進行質(zhì)量檢測，確定濃度和總量是否能夠進行miRNAs的芯片雜交實驗。3.進行miRNAs標記反應體系的準備、10× Blocking Agent的配制、雜交樣品的準備、雜交混合液的配制、芯片雜交、芯片洗滌、芯片掃描、芯片數(shù)據(jù)提取等操作流程，完成miRNAs芯片實驗。并通過圖表對miRNAs雜交實驗結(jié)果進行評價。最終找出差異性miRNAs。4.對芯片雜交實驗的結(jié)果進行熒光定

3、量PCR的驗證，分析結(jié)果的可信度。再將篩選出的miRNAs進行靶基因的預測，并驗證其對靶基因表達的影響。
　　結(jié)果：1.所有血液樣本均已提取血清，并進行記錄、編號及保存。建立血樣數(shù)據(jù)庫，在數(shù)據(jù)庫中篩選出需進行后續(xù)實驗的血清樣本共6個，其中對照組3個，耳聾組3個。2.經(jīng)過對實驗所得miRNAs進行質(zhì)量檢測，耳聾組（編號1-3）和對照組（編號1-3）樣本的miRNAs濃度及質(zhì)量達到芯片雜交實驗的標準。3.從6個樣本的質(zhì)量檢測結(jié)果來看樣

4、本的完整性和純度均符合實驗要求。通過分析miRNA芯片雜交實驗結(jié)果，共篩選出8個差異性miRNAs，它們是hsa-miR-1229-5p，hsa-miR-3162-5p，hsa-miR-4459， hsa-miR-483-5p，hsa-miR-6087，hsa-miR-6088，hsa-miR-638和hsa-miR-4484。4.熒光定量PCR的驗證結(jié)果表明，在所選耳聾組樣本中hsa-miR-1229-5p和hsa-miR-483-5

5、p這兩條miRNAs的表達量均高于對照組。對它們的靶基因進行預測，其中hsa-miR-1229-5p可能的靶基因為ATG101，MAPK1，SLC12A6，SLC25A24，SLC30A8和SLC9C1， hsa-miR-483-5p可能的靶基因為SRF和MAPK3。經(jīng)定量PCR結(jié)果驗證，hsa-miR-1229-5p的靶基因為MAPK1，SLC12A6，SLC25A24和SLC30A8，hsa-miR-483-5p的靶基因為SRF。<

6、br>　　結(jié)論：1.芯片雜交結(jié)果表明，從6個樣本中共篩選出8個差異性miRNAs，它們是hsa-miR-1229-5p， hsa-miR-3162-5p， hsa-miR-4459， hsa-miR-483-5p， hsa-miR-6087， hsa-miR-6088，hsa-miR-638，hsa-miR-4484。2.經(jīng)過驗證發(fā)現(xiàn)職業(yè)性噪聲聾工人血清中hsa-miR-1229-5p，和hsa-miR-483-5p的表達量均高于對照組