2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、建蘭花葉病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齒蘭環(huán)斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是侵染蘭花最常見的兩種病毒。它們使蘭花葉片形成褪綠條紋、凹陷的灰白斑或壞死圈斑等癥狀,導(dǎo)致植株生長不良、開花小而少,花期縮短,給花卉生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。CymMV隸屬線形病毒科(Flexiviridae)、馬鈴薯X病毒屬(Potexvirus),病毒RNA基因組全序列約6-7 kb,與

2、該同屬的其它成員有很高的同源性。整個基因組由5個開放讀碼框架(ORF)構(gòu)成,其中CP基因是完整地ORF5框,長約700nt,編碼24kD的外殼蛋白。ORSV隸屬煙草花葉病毒屬(Tobamovirus),病毒RNA基因組全序列約5-6 kb,含有4個ORF,CP基因是完整的ORF4,長約600nt,編碼17kD的外殼蛋白。
  通過負(fù)染和超薄切片觀察到蝴蝶蘭(P. amabilis)病葉中線狀和桿狀病毒顆粒。進(jìn)一步的組織切片觀察,同

3、時發(fā)現(xiàn)兩種病毒的典型聚集體:CymMV呈帶狀聚集體,粒子多層排列,層間成一定角度或螺旋相疊;ORSV聚集體呈平行、角層狀或螺旋型排列。二種病毒聚集體均出現(xiàn)于薄壁細(xì)胞、細(xì)胞間隙和維管束中,感病細(xì)胞中葉綠體發(fā)育不全;線粒體增生、腫脹甚至空化;細(xì)胞核膨大、空化。通過建立多重 RT-PCR體系,同時擴(kuò)增到建蘭花葉病毒(CymMV)和齒蘭環(huán)斑病毒(ORSV)的外殼蛋白基因。經(jīng)序列測定和同源性比對,與GenBank已知分離物同源性分別達(dá)到98%和9

4、9-100%。從細(xì)胞和分子層面共同揭示了CymMV與ORSV復(fù)合侵染蘭科植物后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病變特征。同時為兩種病毒的復(fù)合侵染提供快速直接的鑒定依據(jù)。
  用RT-PCR方法獲得了CymMV和ORSV外殼蛋白基因,將兩個基因片段分別插入原核表達(dá)載體 pET32c,構(gòu)建載體 pET32c-CymMV-CP和pET32c-ORSV-CP并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后獲得了重組蛋白表達(dá),Western blotting分析證實(shí)表

5、達(dá)產(chǎn)物具有免疫反應(yīng)性。根據(jù)Western blot結(jié)果,將含兩種重組質(zhì)粒的重組菌大量表達(dá),并通過鎳瓊脂糖凝膠純化蛋白,免疫家兔,制備了CymMV和ORSV的多克隆抗體,并通過ELISA測定了抗體效價。
  總之,本研究從細(xì)胞層面、分子層面及免疫學(xué)層面對CymMV和ORSV進(jìn)行了初步研究。探討了感染這兩種病毒的植物組織超微結(jié)構(gòu)病變,建立了多重RT-PCR鑒定體系,為這兩種病毒的快速鑒定提供依據(jù)。原核表達(dá)了病毒外殼蛋白并制備了多克隆抗

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