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1、在本論文耐鹽突變體的篩選部分中,我們利用之前本實(shí)驗(yàn)室所構(gòu)建的鹽芥cDNA表達(dá)文庫(kù),在擬南芥中進(jìn)行大規(guī)模的浸花轉(zhuǎn)化,最終得到了125,000株獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因株系。使用高通量的耐鹽突變體的遺傳篩選方法,我們對(duì)這125,000株獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因株系的后代進(jìn)行了耐鹽篩選。在初次篩選中,我們得到了幾百株可能的耐鹽株系。之后我們對(duì)這幾百株可能的耐鹽株系進(jìn)行了復(fù)篩以確認(rèn)其耐鹽性狀。經(jīng)過(guò)復(fù)篩,許多耐鹽突變體被分離出來(lái)。對(duì)這些耐鹽突變()中分離出的cDNA進(jìn)行
2、分析顯示:在擬南芥中過(guò)量表達(dá)這些基因時(shí),可以使擬南芥具有耐鹽的性狀。本文主要介紹其中的三個(gè)耐鹽突變體ST5-18,ST103-2和ST54-6,其初篩、復(fù)篩的過(guò)程和之后的土壤中耐鹽性狀的進(jìn)一步驗(yàn)證。這種功能基因挖掘的方法或許可以應(yīng)用于其他生物脅迫(抗病基因)和非生物脅迫下抗性基因的分離。 我們采用生產(chǎn)超氧化物(superoxide)的paraquat為抗氧化突變體的選擇劑,對(duì)一個(gè)55,000獨(dú)立轉(zhuǎn)化株系的擬南芥激活突變體庫(kù)進(jìn)行篩
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