擬南芥耐氧化突變體的篩選與相關(guān)基因的功能解析以及一種有效的耐鹽基因挖掘方法的研究.pdf

1、第一部分：擬南芥耐氧化突變體的篩選及相關(guān)基因的功能解析從一個(gè)55，000擬南芥(Arabidopsisthaliana)獨(dú)立激活標(biāo)記T-DNA轉(zhuǎn)化體庫中篩選出一個(gè)在萌發(fā)期具有耐氧化性狀的突變體，命名為OT11-9，Tail-PCR分析結(jié)果表明，攜帶四個(gè)增強(qiáng)子的T-DNA插入到距離At3g47720這一基因ATG密碼1196bp上游堿基位置的啟動(dòng)子，RT-PCR驗(yàn)證了突變體中At3g47720基因表達(dá)增強(qiáng)，通過基因功能分析，At3g477

2、20的過表達(dá)使得轉(zhuǎn)基因野生型擬南芥的耐氧化能力增強(qiáng)，而該基因的缺失突變使突變體對(duì)氧化脅迫超敏感。At3g47720基因的序列分析表明這一基因?qū)儆赟RO家族，被命名為SRO4，而這一基因是如何增強(qiáng)擬南芥的耐氧化性狀這一問題還有待于進(jìn)一步的研究。 第二部分：擬南芥中一種有效的耐鹽基因挖掘方法這里報(bào)道一種有效的基因挖掘方法，能夠在對(duì)研究材料的基因組和遺傳圖譜一無所知的情況下分離出鹽脅迫耐受相關(guān)的基因。用這種方法挖掘鹽芥中耐鹽相關(guān)的基因

3、，鹽芥和擬南芥的親緣關(guān)系很近，能夠耐受極端的高鹽環(huán)境。這種基因挖掘方法的基礎(chǔ)是構(gòu)建鹽芥的cDNA文庫，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入擬南芥，在擬南芥中表達(dá)鹽芥的cDNA文庫，收獲轉(zhuǎn)基因植株的種子形成一個(gè)獨(dú)立的125，000轉(zhuǎn)基因種子庫，利用高通量篩選的方法從中選出一些耐鹽株系。通過PCR擴(kuò)增這些耐鹽株系中的鹽芥cDNA并測(cè)序，在這些被分離出的基因中，發(fā)現(xiàn)了一些編碼小蛋白的基因，并且在擬南芥中的同源基因還未見相關(guān)報(bào)道，功能未知。用這種方法挖掘