IL-6、TLR3基因多態(tài)性及表達(dá)水平與兒童腸道病毒71型腦炎的相關(guān)性研究.pdf

1、本文對(duì)IL-6、TLR3基因多態(tài)性及表達(dá)水平與兒童腸道病毒71型腦炎的相關(guān)性進(jìn)行了研究。本研究主要內(nèi)容包括：
　　第一部分：IL-6基因多態(tài)性及表達(dá)水平與兒童腸道病毒71型腦炎的相關(guān)性研究。
　　目的：觀察IL-6-572C/G(rs1800796)及IL-6-174G/C(rs1800795)基因多態(tài)性與EV71感染的手足口病患兒臨床特征的相關(guān)性，探索不同基因型對(duì)IL-6表達(dá)的影響，探討不同基因型與EV71感染嚴(yán)重程度、腦

2、炎易感性之間的關(guān)系。
　　方法：收集2013年7月到2013年9月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦女兒童醫(yī)院及青島大學(xué)附屬醫(yī)院EV71感染患兒187例。根據(jù)是否存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，分為EV71腦炎組（59例）和EV71感染無(wú)腦炎組（128例）。收集同期在上述醫(yī)院健康體檢的兒童（232例）作為正常對(duì)照。記錄基本臨床資料及實(shí)驗(yàn)室參數(shù)，收集外周血樣本，應(yīng)用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR-RFLP)對(duì)IL-6-572C/G及174

3、G/C基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清或者腦脊液中IL-6濃度。
　　結(jié)果：⑴與EV71感染無(wú)腦炎組（128例）相比，EV71腦炎組（59例）具有更高的IL-6-572GG/GC基因型(40.7 vs.15.6％，OR=3.70,95% CI=1.83–7.51，P=0.001)。IL-6-572G等位基因的頻率亦呈現(xiàn)類(lèi)似結(jié)果，EV71腦炎組IL-6-572 G等位基因的頻率較EV71感染無(wú)腦炎組顯著升

4、高(23.7vs.8.6%,OR=3.31,95% CI=1.80–6.08，P<0.001)。⑵對(duì)IL-6-174 G/C位點(diǎn)的檢測(cè)，無(wú)論在EV71感染組，還是正常對(duì)照組，均僅出現(xiàn)了GG基因型，未見(jiàn)CG及CC基因型，提示在本組人群中未見(jiàn)IL-6-174位點(diǎn)基因多態(tài)性。⑶IL-6濃度與IL-6-572C/G基因型之間的關(guān)系：在EV71感染組，G（GC+GG）等位基因攜帶者（195.1±11.8 pg/ml）血清IL-6濃度比CC純合子（

5、167.7±6.7 pg/ml)顯著升高(p<0.001)，但是在正常對(duì)照組，不同的基因型之間血清IL-6濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。EV71感染患者血清IL-6濃度明顯高于正常對(duì)照組。EV71腦炎組CG/GG基因型(217.1±25.4 pg/ml，n=10)與CC純合子(205.2±30.5 pg/ml，n=10)相比腦脊液IL-6濃度無(wú)顯著性差異。⑷血CRP濃度與IL-6-572C/G基因型之間的關(guān)系呈現(xiàn)相似的趨勢(shì)。在EV71感染組與EV7

6、1腦炎組中，G等位基因攜帶者（GC+GG）血CRP濃度較CC純合子明顯升高（P<0.01）。在EV71感染組，G（GC+GG）等位基因攜帶者(8.61±2.69 mg/l)血清IL-6濃度比CC純合子(7.15±2.79mg/l)(p=0.003)顯著升高。而且，在EV71腦炎組，G等位基因攜帶者（GG+GC）(10.6±1.29 mg/l)血CRP水平較CC純合子(9.31±1.93 mg/l)顯著升高(p=0.005)。⑸與CC純合

7、子（medians of7.8×109/l）相比，G等位基因攜帶者(GG+GC)白細(xì)胞計(jì)數(shù)（median of13.3×109/l）顯著升高（P<0.001）；血糖濃度兩組亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異，G等位基因攜帶者（median of6.8 mmol/l）較CC純合子（median of10.4 mmol/l）顯著升高（P=0.006）。與CC純合子相比，G等位基因攜帶者發(fā)熱持續(xù)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.001)。然而，在性別、年齡、ALT、AS

8、T、CK-MB及病毒載量方面，兩組無(wú)顯著性差異（P>0.05)。
　　結(jié)論：①I(mǎi)L-6-572C/G位點(diǎn)的基因多態(tài)性可能是EV71腦炎的易感因素。②IL-6-572位點(diǎn) G等位基因增加了EV71腦炎發(fā)生的危險(xiǎn)性。③IL-6-572G等位基因可上調(diào)血清IL-6的表達(dá),血清IL-6濃度的升高進(jìn)而可調(diào)節(jié)血CRP的水平。④本組人群中未發(fā)現(xiàn)IL-6-174G/C基因多態(tài)性。
　　第二部分：TLR3基因多態(tài)性及表達(dá)水平與兒童腸道病毒71

9、型腦炎的相關(guān)性研究。
　　目的：觀察TLR3-1377C/T位點(diǎn)基因多態(tài)性與EV71感染的手足口病患兒臨床特征的相關(guān)性，探索血清TLR3與 EV71感染嚴(yán)重程度、腦炎易感性之間的關(guān)系。
　　方法：收集2013年7月到2013年9月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦女兒童醫(yī)院及青島大學(xué)附屬醫(yī)院EV71感染患兒187例。根據(jù)是否存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，分為EV71腦炎組（59例）和EV71感染無(wú)腦炎組（128例）。收集同期在上述醫(yī)院健康體檢的

10、兒童（232例）作為正常對(duì)照。記錄基本臨床資料及實(shí)驗(yàn)室參數(shù)，收集外周血樣本，采用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restricted fragmentlength polymorphism，PCR-RFLP)對(duì)TLR3-1377C/T基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linked immunosorbent assa，ELISA）檢測(cè)血清TLR3濃度。

11、　　結(jié)果：⑴與EV71感染無(wú)腦炎組相比，EV71感染腦炎組TLR3-1377C/T位點(diǎn)基因型分布及等位基因的頻率無(wú)顯著性差異。⑵血清TLR3與IL-6水平及病毒載量的檢測(cè)：與正常對(duì)照組(15.23±2.09ng/ml)相比，EV71感染腦炎組（26.75±4.23ng/ml）及無(wú)腦炎組(35.64±6.65ng/ml)血清TLR3水平均顯著高（t=11.03；t=18.39），但EV71腦炎組（26.75±4.23ng/ml）血清TLR

12、3水平顯著低于EV71感染無(wú)腦炎組(35.64±6.65ng/ml)（t=18.39）；EV71感染患者血清IL-6濃度明顯高于正常對(duì)照組，且EV71腦炎組(212.3±7.1pg/ml)血清IL-6濃度明亦顯著高于EV71感染無(wú)腦炎組(168.2±5.8pg/ml)（t=25.99）；EV71腦炎組(4.0±0.4log10 copies/μl)血EV71病毒載量較EV71感染無(wú)腦炎組(3.2±0.5log10 copies/μ l)

13、高，兩者比較有顯著性差異(t=7.376,P<0.001)。⑶不同年齡組別中血清TLR3水平的檢測(cè)：EV71腦炎組和無(wú)腦炎組血清TLR3水平在不同年齡組別中均較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著高（＜1歲組：腦炎組vs對(duì)照組t=2.791,無(wú)腦炎組vs對(duì)照組t=6.66；≥1歲組：腦炎組vs對(duì)照組t=7.288,無(wú)腦炎組vs對(duì)照組t=11.92），但各年齡組中EV71腦炎組血清TLR3水平較相應(yīng)無(wú)腦炎組明顯低（＜1歲組：t=4.638；≥1歲組：t=2

14、.315），EV71腦炎組TLR3水平＜1歲組患兒顯著低于≥1歲者；而與相應(yīng)＜1歲組相比，≥1歲組EV71感染無(wú)腦炎組及正常對(duì)照組TLR3濃度均無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論：①本研究未發(fā)現(xiàn)TLR3-1377C/T位點(diǎn)的基因多態(tài)性與EV71感染及腦炎的發(fā)生存在相關(guān)性。②EV71感染后血清TLR3的低表達(dá)可能導(dǎo)致其對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用減弱，從而促進(jìn)了EV71腦炎的發(fā)生。③EV71腦炎組血清TLR3的表達(dá)存在年齡差異，嬰兒EV71感染后血清