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文檔簡介
1、【研究背景】
兒童喘息性疾病在臨床非常常見,中華醫(yī)學會兒科學分會呼吸學組將我國5歲以下兒童喘息分成以下3種臨床表型:(1)早期一過性喘息,(2)早期起病的持續(xù)性喘息(指3歲以前),(3)遲發(fā)性喘息/哮喘。細菌或病毒感染、變應原暴露的改變、環(huán)境改變、早產(chǎn)、肺發(fā)育不良肺功能低下、遺傳易感性等因素均可導致喘息的發(fā)生。其危險因素也隨著年齡的改變而改變,表現(xiàn)為不同的年齡段不同的發(fā)病機制。雖然還沒有完全弄清楚這些疾病發(fā)病的分子機制,但是已
2、經(jīng)從分子遺傳學上解釋了為什么有些人易患這些疾病而另一些人不易患這些疾病,是因為他們攜帶易患這些疾病的基因。
遺傳研究發(fā)現(xiàn)過去許多并不會對人類產(chǎn)生危害的某些刺激物或過敏原,現(xiàn)在卻可誘發(fā)喘息的急性發(fā)作或其它變態(tài)反應,這可能與人類的遺傳易感性增加有關(guān),即遺傳易感人群在增多。其中年齡相關(guān)的遺傳易感性受到學者們越來越多的關(guān)注。而年齡相關(guān)的遺傳易感性研究對理解喘息性疾病的基本機制做出了重要貢獻。隨著分子生物學及DNA技術(shù)的發(fā)展,人們在分子
3、水平對哮喘等喘息性疾病的炎癥反應機制的研究取得了很大的進展,而且越來越多的研究證明天然免疫及調(diào)節(jié)性免疫均參與喘息性疾病的發(fā)病過程。
TLRs(Toll-like receptors,TLRs)作為天然免疫系統(tǒng)的主要受體,作為機體識別病原微生物及變應原刺激的第一道天然免疫反應受體,其基因的改變在許多炎癥反應性疾病中起著重要的作用。哮喘等兒童喘息性疾病作為一類慢性炎癥反應性疾病,TLRs基因的改變在其發(fā)病機制中亦起著非常重要的作用
4、。
目前已發(fā)現(xiàn)TLR2、TLR4、TLR6、TLR9、TLR10基因的單核甘酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphisms,SNPs)與哮喘等喘息性疾病有關(guān)。TLR6 SNPs與這些疾病的關(guān)系也得到越來越多的關(guān)注,國外已有研究證明TLR6 Ser249Pro多態(tài)性與兒童哮喘有關(guān)。而國內(nèi)尚無TLR6 Ser249Pro多態(tài)性與疾病關(guān)系的研究報道。
【研究目的】
(1)喘息患兒及健康兒童
5、TLR6 Ser249Pro基因型及等位基因頻率分布;
(2) TLR6 Ser249Pro基因多態(tài)性與5歲以下兒童喘息的發(fā)病有無相關(guān)性;
(3)≤3歲喘息患兒與健康兒童相比TLR6 Ser249Pro基因多態(tài)性有無統(tǒng)計學差異;(4)3歲<年齡≤5歲喘息患兒與健康兒童相比TLR6 Ser249Pro基因多態(tài)性有無統(tǒng)計學差異。
(5)≤3歲喘息患兒與同年齡段健康兒童相比TLR6 Ser249Pro基因多態(tài)性有
6、無統(tǒng)計學差異;
(6)3歲<年齡≤5歲喘息患兒與同年齡段健康兒童相比TLR6 Ser249Pro基因多態(tài)性有無統(tǒng)計學差異?!狙芯繉ο蟆?br> 喘息患兒來自2007年11月-2008年8月鄭州大學第一附屬醫(yī)院兒科住院及門診病人和鄭州市兒童醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院病人101例,男78例,女23例,均排除先天性肺發(fā)育不良、肺功能低下及支氣管異物等因素引起的喘息;對照組共96例,男76例,女20例,均排除個人及家族喘息、哮喘和變態(tài)反應性疾
7、病史。
【研究方法】
1.101個病例及96個對照的全血標本基因組DNA提取。
2.基因組DNA中TLR6 Ser249Pro相應位點片段PCR擴增。PCR產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果采用凝膠成像系統(tǒng)檢驗。3.TLR6基因的Ser249Pro位點PCR擴增片段經(jīng)AvaⅡ內(nèi)切酶在37℃水浴槽中酶切3h;酶切產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果采用凝膠成像系統(tǒng)檢驗。
【研究結(jié)果】
1.喘
8、息患兒基因型頻率分布為:CC型93(92%),CT型7(6.9%),TT型1(1.1%);對照組基因型頻率分布為:CC型78(81.3%),CT型15(15.6%),TT型3(3.1%)。兩者比較無統(tǒng)計學差異(χ~2=5.101,P=0.078)。
2.喘息患兒等位基因頻率為:C193(95.5%),T9(4.5%);對照組等位基因頻率為:C171(89.1%);T21(10.9%)。兩者比較有統(tǒng)計學差異(χ~2=5.88,P
9、=0.015)。
3.≤3歲喘息患兒與對照組等位基因頻率相比差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=7.592,P=0.006)。
4.3歲<年齡≤5歲喘息患兒與對照組等位基因頻率相比差異無統(tǒng)計學意義(χ~2=0.421,P=0.561)。
5.≤3歲喘息患兒與同年齡段健康兒童等位基因頻率相比差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=6.495,P=0.0108)。
6.3歲<年齡≤5歲喘息患兒與同年齡段健康兒童等位基因頻率相
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