TLR2基因多態(tài)性與牛結(jié)核病的易感相關(guān)性研究.pdf

1、牛結(jié)核病是由牛分枝桿菌所引起的一種人畜共患的慢性消耗性傳染病，可通過病畜傳染給人類或其他動物。牛結(jié)核病的傳染流行嚴重的影響到畜牧業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，更嚴重威脅著人類的健康。本課題從分子水平上做牛結(jié)核病的相關(guān)研究，有助于人們控制和消滅牛結(jié)核病，本試驗也為以后的相關(guān)研究奠定基礎。
　　本試驗將通過“PPD和 ELISA”方法對河南省部分地區(qū)（洛陽、宜陽、蘭考和南陽）的部分黃牛進行結(jié)核病檢測，運用“PCR和DNA測序”的方法并結(jié)合統(tǒng)計學軟

2、件分析，檢測黃牛 TLR2完整編碼區(qū) SNP位點與牛結(jié)核病發(fā)生的關(guān)聯(lián)性，探討這些 SNP影響牛結(jié)核病易感性的分子機理。本試驗對區(qū)分結(jié)核易感高風險牛群以及深入理解牛結(jié)核的發(fā)病機理具有重要意義。同時，也為牛結(jié)核病的防制和牛的遺傳育種提供新思路。
　　1.運用“PPD和ELISA”方法對黃牛進行結(jié)核病檢測。
　　對河南部分地區(qū)（洛陽市、宜陽縣、蘭考縣以及南陽市）選定的382頭黃牛進行結(jié)核菌素變態(tài)反應(PPD)，結(jié)果顯示，PPD檢測

3、出陽性病例11頭（其中疑似病例2頭），占2.36％。洛陽、宜陽、蘭考、南陽這四個地區(qū)的檢測結(jié)果均發(fā)現(xiàn)有陽性病例，陽性率分別為1.89%、2.35%、2.65%和2.29%，蘭考地區(qū)黃牛結(jié)核病陽性率最高，為2.65%，洛陽地區(qū)黃牛結(jié)核病陽性率最低，為1.89%。對這些地區(qū)233份黃牛血液樣本進行γ干擾素(ELISA)檢測，檢測出陽性病例3頭，占1.29%。對156例黃牛做 PPD和 ELISA雙重檢測，結(jié)果呈雙陽性的病例2頭，洛陽和南陽各

4、有一例，占檢測總數(shù)的1.28%。
　　2.根據(jù)GenBank中發(fā)表的牛TLR2基因序列設計引物，通過PCR方法對黃牛的TLR2基因進行分段擴增并測序。
　　測序得到包含TLR2完整編碼區(qū)以及5’端和3’端非編碼區(qū)的2399bp的全序列。序列分析結(jié)果表明，黃牛 TLR2基因開放閱讀框全長2355bp，共編碼784個氨基酸。黃牛的 TLR2基因編碼區(qū)與荷斯坦牛的相比發(fā)生了16個堿基突變，其中9個發(fā)生在胞外區(qū)，2個發(fā)生在跨膜區(qū)，5

5、個發(fā)生在胞內(nèi)區(qū)。與GenBank上已發(fā)表的其它動物TLR2基因參考序列進行比較，結(jié)果顯示黃牛與荷斯坦牛、野牛、水牛、山羊、綿羊、豬、大猩猩和人的同源性分別為99.3%、99.3%、98.0%、96.3%、95.5%、85.4%、83.2%、83.1%。TLR2 N’末端存在信號肽且可能在21位氨基酸處存在裂解位點，蛋白分子結(jié)構(gòu)預測 TLR2蛋白含1個跨膜結(jié)構(gòu)域。
　　3.結(jié)合統(tǒng)計學軟件檢測60頭健康黃牛和26頭結(jié)核病陽性黃牛 TL