EV71-CA16聯(lián)合滅活疫苗免疫保護效果研究.pdf

1、目的:利用腸道病毒71型-柯薩奇病毒A組16型(EV71-CA16)聯(lián)合滅活疫苗，對動物體內(nèi)和體外的保護效果進行研究。嘗試用致敏的T淋巴細胞通過腹腔過繼回輸?shù)姆椒ń⑦^繼免疫乳鼠模型，對細胞免疫反應與保護作用之間的關系進行探索性研究。
　　方法:用Vero細胞培養(yǎng)疫苗候選株EV71-KM和CA16-KM，病毒收獲后經(jīng)β-丙內(nèi)酯滅活，Al(OH)3佐劑吸附，制成實驗性疫苗。實驗性疫苗分別于第0和14天經(jīng)肌肉注射免疫8周齡ICR雌鼠，

2、100μl/只，聯(lián)合免疫組免疫劑量分為:EV71256EU+CA1632EU組、EV71256EU+CA16320EU組與EV71256EU+CA16960EU組，對照組注射等體積PBS，第一次免疫后1h與雄鼠合籠，隨其交配，分娩后24h內(nèi)采集母鼠和乳鼠的血液用于血清中和抗體滴度的檢測;同時用100LD50強毒株(EV71-CC，CA16-CC)經(jīng)顱內(nèi)注射進行攻毒，連續(xù)21天觀察其臨床癥狀與死亡情況，評價聯(lián)合疫苗對乳鼠的保護作用。用CA

3、16-KM滅活疫苗（抗原含量為32EU/100μl）經(jīng)腹腔注射免疫1日齡SPF級ICR乳鼠2次，間隔2周，40μl/只，對照組注射等體積PBS，末次免疫后第7天，以安樂法處死小鼠，無菌條件下取出脾臟，分選脾臟單個核細胞、T細胞、B細胞、記憶性T細胞、效應性T細胞，將分選的細胞經(jīng)腹腔注射回輸1日齡乳鼠，回輸2h后用強毒株(CA16-CC)經(jīng)顱內(nèi)注射攻擊，連續(xù)21天觀察其臨床癥狀與死亡情況，評價細胞免疫反應與保護作用之間的關系。
　　

4、結果:各實驗組未檢測到血清特異性中和抗體;EV71-KM滅活疫苗和CA16-KM滅活疫苗之間沒有交叉保護作用。兩種疫苗單獨免疫雌鼠能夠完全保護其新生乳鼠抵抗相應病毒致死劑量的攻擊;聯(lián)合免疫時，EV71256EU+CA1632EU劑量組，對EV71的保護率為100％，對CA16的保護率及EV71和CA16同時攻毒的保護率為0％; CA16免疫劑量提高到320EU時，對EV71和CA16同時攻毒總的保護率為30％;對EV71的保護率為100

5、％，對CA16保護率為67％。CA16免疫劑量提高到960EU時，對兩個病毒同時攻擊的保護率為70％，對EV71和CA16分別攻擊的保護率均達到100％，對照組的保護率為0％。CA16滅活疫苗免疫組小鼠脾臟單個核細胞以2×107/只回輸ICR乳鼠，對CA16攻擊產(chǎn)生100％的保護;免疫組T細胞以1×107/只回輸ICR乳鼠，對CA16攻擊產(chǎn)生60％的保護;免疫組B細胞以1×107/只回輸ICR乳鼠，對CA16的攻擊產(chǎn)生56％的保護;免疫

6、組CD4+T和CD8+T細胞以5.0×106/只回輸裸乳鼠、免疫組記憶性T細胞、效應性T細胞以2.0×105/只回輸裸乳鼠后對病毒攻擊均無保護，對照組對病毒攻擊均無保護。
　　結論:EV71-CA16聯(lián)合免疫動物可誘導產(chǎn)生針對兩種病毒的免疫反應。EV71256EU在與三個CA16不同配比劑量組中均可產(chǎn)生完全保護;CA16低劑量組沒有有保護作用，提高劑量后，保護率也提高。致敏的脾臟單個核細胞過繼回輸至新生乳鼠體內(nèi)可完全保護其抵抗CA