銀杏黃酮類化合物含量的時空分布研究.pdf

1、銀杏原產(chǎn)于我國，雌雄異株，為珍貴的孑遺植物，被譽為“活化石”，具重要研究價值和利用價值。銀杏中類黃酮、萜內(nèi)酯和聚戊烯醇等次生代謝產(chǎn)物具重要生物活性，其黃酮類化合物含量已成為《銀杏種核質(zhì)量等級》國家標準和國際市場規(guī)定的種核和銀杏葉提取物EGb產(chǎn)品的重要質(zhì)量指標。隨著銀杏核用和葉用生產(chǎn)標準化實施及其產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，迫切需要高含量黃酮類化合物的核用和葉用品種進行品種結(jié)構(gòu)改良，以促進銀杏產(chǎn)業(yè)的提升和可持續(xù)發(fā)展。本研究選用揚州大學銀杏種質(zhì)資源圃內(nèi)

2、樹勢、栽培管理一致的13年生雄株和雌株各15株，其中雌株為核用主栽品種佛指、馬鈴和圓子類共15株。2013-2014年，各供試植株分別于4、5、6、7、8、9、10月份隨機采取100張葉片，7、8、9、10月份各供試核用主栽品種植株隨機采取50粒種實，經(jīng)處理后采用響應面法優(yōu)化料液比、溶劑濃度、提取時間、提取溫度等影響黃酮類化合物含量的主要作用因子形成的最佳提取體系分別提取葉片、種仁、外種皮中蘆丁和槲皮素、山奈酚、異鼠李素等黃酮類化合物，

3、采用HPLC測定其含量，并測定分析雌株種核的形態(tài)大小及重量、含水量及可溶性糖、淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等含量。結(jié)果表明:
　　1、銀杏葉片蘆丁提取含量(Y)依料液比(A)、乙醇濃度(B)、提取時間(C)、提取溫度(D)作用而變化的回歸方程為:Y=+0.94-0.041A+0.055B-9.773*10-3C+0.018D-8.959*10-3AB-0.090AC+0.038AD-0.060BC-0.14B D-0.075CD-0.066

4、 A2-0.079B2-0.11C2-0.30D2(R2=0.9286)，各主要作用因子間存在交互作用。Y響應于各主要作用因子的最佳值分別為:料液比1∶17.11(g∶ml)、乙醇濃度71.92％、提取時間38.93min、提取溫度70.24℃，在此條件下，銀杏葉片蘆丁最佳提取含量可達到0.940767mg/g;
　　2、銀杏葉片槲皮素、山奈酚、異鼠李素以乙醇為提取溶劑，優(yōu)化提取體系為:料液比1∶15、70％的乙醇-25％鹽酸4∶

5、1、提取溫度80℃、提取時間40min、超聲提取次數(shù)2次，采用RP-HPLC分別測定其含量，換算成槲皮素苷、山奈酚苷、異鼠李素苷的系數(shù)分別為2.51、2.64、2.39，經(jīng)Hasler的三因子法換算得到葉片黃酮類化合物含量;
　　3、銀杏雌雄株葉片的蘆丁含量季節(jié)變化表現(xiàn)出不同的趨勢，即分別由4月份的1.749mg/g和1.699mg/g下降到8月份的0.772mg/g和9月份的0.762mg/g，后出現(xiàn)上升至10月份的1.111m

6、g/g和0.968mg/g。雖雌株的蘆丁含量稍高于雄株，但其差異未達到顯著水平，故選用葉片高含量黃酮類化合物的雄株作為銀杏葉用優(yōu)質(zhì)資源更具理論和生產(chǎn)意義;
　　4、銀杏葉片的槲皮素、山奈酚、異鼠李素等黃酮苷元含量與黃酮類化合物含量的季節(jié)變化基本相同。雌雄株4月份葉片的含量最高，其黃酮類化合物含量分別為4.347mg/g和為3.458mg/g，后均呈下降趨勢。而雌株含量分別在6月份和9月份出現(xiàn)峰值，雄株僅在9月份出現(xiàn)峰值。雌雄株間葉

7、片黃酮類化合物、槲皮素及異鼠李素含量差異不顯著，而山奈酚含量差異達到顯著水平。
　　5、雌株種仁和外種皮黃酮類化合物的含量季節(jié)變化相同，兩者具有極顯著相關（r=0.970**）。其7月份的黃酮類化合物的含量分別為0.01067mg/g和0.09892 mg/g，后下降到9月份出現(xiàn)低谷，其后又開始上升，至10月份采收時其含量分別為0.005306mg/g和0.05460mg/g。
　　6、銀杏核用單株JSYX-2、JSYX-4

8、、JSYX-11、JSYX-12、JSYX-13中，其葉片、外種皮、種仁中黃酮類化合物含量差異達到極顯著水平，其中JSYX-11葉片中黃酮類化合物含量最高，JSYX-12的種仁及外種皮中黃酮類化合物含量均表現(xiàn)最高。株間種仁中可溶性糖、淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪含量差異均達到極顯著水平，其最高分別JSYX-11、JSYX-4、JSYX-13, JSYX-13，分別為4.845％、68.849％、4.354％、5.500％。
　　7、經(jīng)聚類分

9、析，供試的15株銀杏雄株葉片的黃酮類化合物含量可分為4類。第Ⅳ類包括3-9、3-10、9-12、3-1、7-9，其黃酮類化合物含量較高，9月份蘆丁、槲皮素、山奈酚、異鼠李素及黃酮類化合物含量的平均值分別為1.0056mg/g、0.3468mg/g、0.4916mg/g、0.2554mg/g和2.2814mg/g，可推薦為銀杏葉用優(yōu)選雄株。
　　8、對供試的15株銀杏雌株種仁黃酮類化合物含量進行聚類分析，供試雌株可以分為2類，第Ⅰ類