莪術(shù)油對阿霉素耐藥的人甲狀腺未分化癌細(xì)胞株HTh74Rdox的作用研究.pdf

1、目的:探討莪術(shù)油對阿霉素誘導(dǎo)耐藥的人甲狀腺未分化癌細(xì)胞株HTh74Rdox增殖和耐藥性的影響及機制。
　　方法:用不同濃度莪術(shù)油(0、60、90、120mg/L)處理HTh74Rdox24小時后，于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測莪術(shù)油對HTh74Rdox細(xì)胞增殖的抑制作用;細(xì)胞流式術(shù)(Flow cytomety，F(xiàn)CM)檢測HTh74Rdox細(xì)胞周期變化和凋亡;蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot，WB

2、)檢測抑凋亡蛋白（Bcl-2）和促凋亡蛋白(Bax)的表達;熒光定量(Quantitative polymerase chain reaction，qPCR)檢測多藥耐藥性基因1(Multi-drugresistance gene1，MDR1)和三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G2(ATP-binding cassette superfamilyG member2，ABCG2)信使核糖核酸(Messenger RNA，mRNA)的變化。

3、　　結(jié)果:用不同濃度莪術(shù)油(0、60、90、120mg/L)處理HTh74Rdox24小時后，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)可見，從莪術(shù)油濃度為60mg/L起有部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)皿;隨著莪術(shù)油處理濃度的增加，細(xì)胞密度系數(shù)降低，貼壁細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞形狀由梭形變?yōu)樗槠?、顆粒，待莪術(shù)油濃度增加至120mg/L，細(xì)胞幾乎全部脫離培養(yǎng)皿，細(xì)胞形狀完全變?yōu)椴灰?guī)則形狀，死亡的細(xì)胞凝結(jié)成團，細(xì)胞液可見渾濁。MTT結(jié)果顯示:隨著莪術(shù)油刺激濃度的升高，莪術(shù)油抑制

4、HTh74Rdox細(xì)胞增殖的作用越來越強，具有時間依賴性(P＜0.05)。流式結(jié)果顯示:莪術(shù)油可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞表現(xiàn)為早期凋亡(P＜0.01);Western Blot結(jié)果顯示:莪術(shù)油可以增加Bax蛋白表達，可以抑制Bcl-2蛋白表達，使Bax/Bcl-2比值增加(P＜0.05);qPCR:莪術(shù)油可使MDR1和ABCG2的mRNA表達減少。用單藥莪術(shù)油、單藥阿霉素或聯(lián)合用藥刺激HTh74Rdox細(xì)胞24小時后，MTT法分析示，2.0m

5、g/L阿霉素+90ml/L莪術(shù)油組與2.0mg/L阿霉素+0ml/L莪術(shù)油組比較，均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，提示阿霉素與莪術(shù)油聯(lián)用后，可增強阿霉素的細(xì)胞毒作用;當(dāng)阿霉素用藥濃度減少至1.0mg/L的時候，加入低濃度(45ml/L)莪術(shù)油后，與1.5mg/L阿霉素+45mg/L莪術(shù)油組比較，其細(xì)胞毒作用沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，提示加入低濃度莪術(shù)油可減少阿霉素的用量，由此可見，莪術(shù)油對阿霉素具有明顯的聯(lián)合協(xié)同作用。