黔產莪術油成分分析及其對直腸癌SW1463細胞株凋亡因子的影響研究.pdf

1、目的：利用GC-MS法分析比較四種炮制品的黔產莪術中揮發(fā)油含量及其化學成分的差別，確定黔產莪術油中所含的主要成分，并比較四者所含化學成分的異同；研究莪術油對直腸癌SW1463細胞株的增殖抑制作用，并探討其對直腸癌SW1463細胞株抑制作用的可能機制。
　　方法：通過水蒸氣蒸餾法提取不同炮制類型的黔產莪術飲片中揮發(fā)油類成分，采用GC-MS法對黔產莪術油的化學成分進行分析，通過標準譜庫檢索分析計算，確定黔產莪術揮發(fā)油中所含的主要成分。

2、將經水蒸氣蒸餾提取的莪術揮發(fā)油，配制成40、80、120、160、200、240、280 mg·L-1等梯度濃度，采用四氮唑鹽（MTT）比色法檢測不同濃度莪術油干預直腸癌SW1463細胞24、48、72h后對細胞增殖抑制的影響，計算莪術油對細胞的抑制率及IC50；根據(jù)藥物的IC50設定濃度為80，120，160，200 mg·L-1的梯度劑量組干預細胞24h，采用倒置顯微鏡觀察不同濃度莪術油對直腸癌SW1463細胞的形態(tài)學影響，Giem

3、sa染色法觀察莪術油對 SW1463細胞增殖凋亡形態(tài)學的影響；采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測莪術油對直腸癌細胞內Capase-3，Bax與Bcl-2蛋白表達的影響。
　　結果：從4種莪術飲片中共檢測出78種化學成分，其中鮮品莪術揮發(fā)油中有58個化學成分，生切飲片揮發(fā)油中有53個化學成分，蒸制飲片揮發(fā)油中有52個化學成分，醋炙莪術揮發(fā)油中有51個化學成分。揮發(fā)油中的主要成分為單萜和倍半萜類，但是不同炮制法制備的黔

4、產莪術中揮發(fā)油的含量及其成分組成存在較大的差異。MTT比色法檢測發(fā)現(xiàn)莪術油對SW1463細胞增殖有明顯的抑制作用，并呈一定的時間-劑量依賴性，24 h、48 h和72 h的半數(shù)抑制率(IC50)分別為144.33、134.11、120.04 mg·L-1；Giemsa染色可見細胞明顯的凋亡形態(tài)學特征；Western blot表明，莪術油干預SW1463細胞株24 h后，與陰性對照組比較，Caspase-3、Bax的蛋白表達上調(P﹤0.

5、05，P﹤0.05)，Bcl-2的蛋白表達下調(P﹤0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：1.黔產莪術油的主要成分為單萜和倍半萜類，不同炮制法制備的黔產莪術揮發(fā)油的含量及其成分組成存在較大差異。2.不同濃度的黔產莪術油對直腸癌SW1463細胞增殖有一定的抑制作用，且隨著時間的增長及濃度增高而增強，呈一定的時間-劑量依賴性。3.黔產莪術油可明顯抑制直腸癌 SW1463細胞增殖，誘導細胞凋亡，其機制可能與上調Caspase-3和B